[发明专利]一种取胚缓冲液及其应用

摘要

本发明属于生物化学领域，涉及一种取胚缓冲液及其应用，步骤如下：将取胚缓冲液水浴备用，向培养皿中加入PBS缓冲液；取出冷藏的子宫组织移至恒温台；在恒温台上，放置另一培养皿和子宫组织，剪掉子宫的肠系膜，在远端输卵管处剪开子宫角，捏紧远端子宫角，剪开近端子宫角，将子宫分成两个部分，在剪开的子宫角近端处，注入取胚缓冲液，冲刷子宫角，从子宫角远端开始，向子宫角近端挤压包含取胚缓冲液在内的子宫角内容物到培养皿内；将培养皿移至体视镜下寻找胚胎，并逐个分离胚胎至加有PBS缓冲液的培养皿中漂洗并编号记录。本发明可高效地收获胚胎，且能保证所收获胚胎的活力，收获到的胚胎可用于细胞培养及发育学和繁殖学研究。

主权项

1.一种取仔猪神经胚时期胚胎的取胚缓冲液的应用，其特征在于：步骤如下：（1）将取胚缓冲液置于37℃恒温水浴备用，向培养皿中加入1×PBS缓冲液，冰浴备用，取出冷藏的子宫组织，将子宫组织移至37℃恒温台；（2）在37℃恒温台上，放置2‑3个培养皿，剪掉子宫的肠系膜，平展子宫，在远端输卵管处剪开子宫角，捏紧远端子宫角，剪开近端子宫角，将子宫分成两个部分，在剪开的子宫角近端处，注入100‑200mL备用的37℃取胚缓冲液，冲刷子宫角，从子宫角远端开始，向子宫角近端挤压包含取胚缓冲液在内的子宫角内容物到培养皿内；（3）将试验步骤（2）获得的盛有子宫角内容物培养皿移至体视镜下，寻找胚胎，并逐个分离胚胎；（4）将分离得到的胚胎，连同其相连的胚胎外组织一起转移至装有PBS缓冲液的培养皿中，漂洗胚胎并编号记录；所述取胚缓冲液，主要是由磷酸二氢钾溶液、磷酸氢二钠溶液、BSA干粉和蒸馏水组成，所述取胚缓冲液的配制方法为：取磷酸二氢钾溶液和磷酸氢二钠溶液按体积比3:7混匀，调pH至7.2，制得的1×PBS缓冲液，然后加入1×PBS缓冲液质量的0.1%的BSA干粉，完成取胚缓冲液的配制；所述磷酸二氢钾溶液和磷酸氢二钠溶液的浓度都为0.1mol/L。