[发明专利]产3-羟基丙酸的重组谷氨酸棒杆菌、其构建方法及应用

摘要

本发明涉及产3‑羟基丙酸的重组谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用，所述重组谷氨酸棒杆菌是通过在谷氨酸棒状杆菌中过表达内源的磷酸二羟基丙酮磷酸酯酶基因hdpA，并过表达甘油脱氢酶基因gldA、甘油脱水酶及其激活因子基因pduCDEGH及3‑羟基丙醛脱氢酶基因aldH构建得到的。利用该重组菌发酵生产3‑羟基丙酸，由于谷氨酸棒杆菌能够利用不同的廉价原料进行发酵，因此可进一步降低原料的成本。本发明解决了生物安全性以及菌株对酸的耐受性问题。同时发酵过程中的菌体可作为产品，用于饲料添加剂中。本方法副产物少，使终产物3‑羟基丙酸的分离过程得到简化。

主权项

1.产3‑羟基丙酸的重组谷氨酸棒杆菌的构建方法，其特征在于，所述产3‑羟基丙酸的重组谷氨酸棒杆菌的构建方法包括：通过在谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)中过表达内源的磷酸二羟基丙酮磷酸酯酶基因hdpA，并过表达甘油脱氢酶基因gldA、甘油脱水酶及其激活因子基因pduCDEGH及3‑羟基丙醛脱氢酶基因aldH；所述甘油脱氢酶基因gldA、3‑羟基丙醛脱氢酶基因aldH来源于大肠杆菌，基因gldA和aldH的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:2和4所示；所述甘油脱水酶及其激活因子基因pduCDEGH来源于克雷伯氏肺炎杆菌，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述磷酸二羟基丙酮磷酸酯酶基因hdpA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述谷氨酸棒状杆菌为ATCC 13032；所述方法具体为：将基因hdpA和gldA构建到大肠杆菌‑谷氨酸棒杆菌穿梭质粒pEC‑K18mob2上，得到的重组载体命名为pEC‑hdpA‑gldA，然后用pEC‑hdpA‑gldA转化谷氨酸棒状杆菌，得到的重组菌命名为C.glutamicum/pEC‑hdpA‑gldA；再将甘油脱水酶及其激活因子基因pduCDEGH以及基因aldH构建到大肠杆菌‑谷氨酸棒杆菌穿梭质粒pXMJ19上，得到的重组载体命名为pXMJ‑aldH‑pdu，用pXMJ‑aldH‑pdu转化重组菌C.glutamicum/pEC‑hdpA‑gldA，筛选阳性克隆即为重组谷氨酸棒杆菌。