[发明专利]一种制备固定化碱性脂肪酶的方法

摘要

本发明涉及一种制备固定化碱性脂肪酶的方法，属于生物化工技术领域。本发明针对目前国内碱性脂肪酶菌株的种类较少，产率低，同时在固定化过程中，工艺步骤复杂，固定化过程中酶活损失严重的问题，本发明首先利用芦花内部纤维素和木质素膨松，可做天然载体的特点，对其进行碱化处理，去除其中部分杂质，随后通过提取含油污泥内的微生物进行培养，再通过紫外和红外进行改性，筛选出高产率产碱性脂肪酶菌株，随后将其与处理后的芦花及其他营养物进行混合发酵，通过微生物分解芦花内的糖类物质，最后将酶固定于固化内的纤维素及木质素内，从而得到固定化碱性脂肪酶。

主权项

一种制备固定化碱性脂肪酶的方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）按料液比1:2，取芦花和质量分数为30％的氢氧化钠溶液放入容器中，对容器进行加热至50～60℃，以150r/min搅拌30～40min，再趁热过滤，使用蒸馏水冲洗过滤物直至过滤物pH至中性，将冲洗后的过滤物放入50℃烘箱中干燥10～15min，得活化处理芦花；（2）将上述所得的活化处理芦花浸泡于大豆油中，使用质量分数为40％氢氧化钠溶液调节pH至8.5～9.5，随后将混合物移至超声振荡器中，在22～24KHz下振荡30～40min，再进行过滤，收集过滤物，得固定化载体基体，备用；（3）将含油污泥与无菌水按质量比1:2放入混合机中，以300r/min搅拌10～15min，再进行过滤，收集过滤液，将过滤液接种于固体培养基中，接种量为15～20％，随后将固体培养基移至恒温培养箱中，设定温度为28～32℃，培养4～6天后，将培养基移至波长为320～345nm的紫外灯下进行照射5～6h，再将培养基移至波长为770～790nm的红外灯下照射40～50s；（4）在上述红外灯照射结束后，向固体培养基中加入固体培养基质量4～6％的大豆油和固体培养基质量10～15％的蔗糖搅拌均匀，再将固体培养基移至恒温培养箱中培养直至固体培养基表面菌丝长度达0.5～1.0cm，使用流速为10mL/min的无菌水淋洗固体培养基表面，直至固体培养基表面的菌丝完全洗脱，收集淋洗液，得改性菌丝悬浮液；（5）按重量份数计，取70～80份备用的固定化载体基体、12～15份葡萄糖、8～10份琼脂及15～18份淀粉，搅拌均匀后放入灭菌锅，杀菌消毒，得载体基料，按固液比1:2～4，取载体基料和上述所得的改性菌丝悬浮液，将载体基料放入发酵罐中，再向其中加入改性菌丝悬浮液，设定发酵罐温度为28～32℃，转速为180～200rpm，发酵4～7天后对发酵罐中的发酵混合物进行过滤，使用无菌水冲洗过滤物6～9次；（6）将上述冲洗后的过滤物放入蒸馏水中浸泡，以120r/min搅拌20～30min，再将其放入喷雾干燥器中进行喷雾干燥，即可得到固定化碱性脂肪酶。