[发明专利]一种基于INDEL-SNP连锁关系分析混合样本DNA的方法

摘要

本发明一种基于INDEL‑SNP连锁关系分析混合样本DNA的方法，属于法医学检测技术领域。所述方法包括(1)、对混合样本DNA进行RT‑PCR扩增，得到包含INDEL+SNP两个连锁位点的PCR产物；(2)、对步骤(1)中得到的扩增产物中所含有的SNP进行分型。本发明所述的方法具有以下优点：设计的INDEL‑SNP引物有种属特异性，适合法医学检测，可用于法医学常见混合斑的DNA检测分析，不论这些混合斑是否是同种细胞类型的还是有不同种的细胞类型构成；还可能用于骨髓移植手术或其他器官移植手术后外周血的移植物成分的监测，也将鉴定的时限大大提前。

主权项

1.一种基于INDEL‑SNP连锁关系分析混合样本DNA的方法，其特征在于：所述方法包括下述步骤：(1)、对混合样本DNA进行RT‑PCR扩增，得到包含INDEL和SNP两个位点的RT‑PCR扩增产物的具体步骤为：对提取的DNA样本分别用22对引物进行RT‑PCR，其中反应体系为10μl体系：SYBR5μl、PRIMER1μl、DNA100ng，补水至10μl；RT‑PCR的扩增条件：95℃30s；95℃5s，58℃30s，共40个循环；为了建立PCR产物的溶解曲线，扩增反应结束后，继续从60℃按每5s升高1℃缓慢加热到95℃；所述22对引物为：P1：SEQ No.1、SEQ No.2；P2：SEQ No.3、SEQ No.2；P3：SEQ No.4、SEQ No.5；P4：SEQ No.6、SEQ No.5；P5：SEQ No.7、SEQ No.8；P6：SEQ No.9、SEQ No.8；P7：SEQ No.10、SEQ No.11；P8：SEQ No.12、SEQ No.11；P9：SEQ No.13、SEQ No.14；P10：SEQ No.15、SEQ No.14；P11：SEQ No.16、SEQ No.17；P12：SEQ No.18、SEQ No.17；P13：SEQ No.19、SEQ No.20；P14：SEQ No.21、SEQ No.20；P15：SEQ No.22、SEQ No.23；P16：SEQ No.24、SEQ No.23；P17：SEQ No.25、SEQ No.26；P18：SEQ No.27、SEQ No.26；P19：SEQ No.28、SEQ No.29；P20：SEQ No.30、SEQ No.29；P21：SEQ No.31、SEQ No.32；P22：SEQ No.33、SEQ No.32；(2)、对步骤(1)中得到的扩增产物中所含有的SNP进行分型。