[发明专利]金黄色葡萄球菌扫描电子显微镜样品快速制备的方法

摘要

本发明涉及一种生物样品制备方法，具体为金黄色葡萄球菌扫描电子显微镜样品快速制备的方法，培养金黄色葡萄球菌制备得菌悬液；部分菌悬液制成标准试验菌悬液，部分菌悬液获得菌体；标准试验菌悬液菌体加入到戊二醛固定液中固定4h；采用无菌去离子水清冼，再采用不同质量浓度梯度的叔丁醇脱水，将离心浓缩后的菌液滴入到纯叔丁醇中干燥；用离子溅射喷金后，得到样品。该制备方法减少金黄色葡萄球菌的分泌物干扰样品的成像质量；消除磷酸盐颗粒将部分样品覆盖并遮蔽的现象；降低样品出现微小的形变和避免生物膜小部分脱落；避免菌体生物膜表面龟裂或不同程度皱缩凹陷甚至是断裂，消除对菌体表面损伤；缩短样品制备的时间,降低了制样成本。

主权项

金黄色葡萄球菌扫描电子显微镜样品快速制备的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在固体肉汤培养基上，培养金黄色葡萄球菌，将培养出的单菌落转移制液体肉汤培养基里，于37℃的空气浴振荡器中以200rpm培养8～10h，得到菌悬液；(2)部分菌悬液以8000rpm离心3～5min,弃掉上清液后，菌体沉淀用已灭菌的液体肉汤培养基稀释至10⁵～10⁶cfu/mL作为标准试验菌悬液，储存于4℃的冰箱中；(3)再取部分菌悬液以8000rpm离心3～5min后，弃掉上清液，获得菌体；(4)将步骤(2)获得的标准试验菌悬液与步骤(3)获得的菌体加入到质量浓度为2.5％戊二醛固定液中于4℃冰箱单固定4h；(5)采用无菌去离子水清冼2～3次；(6)采用不同质量浓度梯度的叔丁醇脱水，依次为30％、50％、70％、85％、95％各1次，每次5min/次；再用100％叔丁醇脱水2次，每次15min/次；每次脱水后均需以8000rpm、3～5min离心后，弃掉上清液，再转入至下一次脱水试剂，用移液枪反复吹打3～5次，打散菌块；(7)将离心浓缩后的菌液滴入到纯叔丁醇中在4℃冰箱冷冻10min后，放入至真空干燥箱内干燥；(8)待干燥后的样品温度升到室温后取出倒入至培养皿，轻摇分散菌体粉末；采用碳导电胶带一面粘在盖玻片上，另一面倒扣轻压在菌体粉末上，翻正后将菌体粉末铺平，用离子溅射喷金后，得到样品。