[发明专利]一种TNFSF15可溶性蛋白的纯化方法

摘要

本发明涉及一种TNFSF15可溶性蛋白的纯化方法，包括如下步骤(1).IPTG诱导；(2).菌体裂解；(3).上柱洗脱；(4).除盐分装。本发明纯化方案通过低温诱导的方式，并且以很低的IPTG诱导浓度，降低蛋白在包涵体中的表达，提升可溶性蛋白的含量，并用较为温和的裂解纯化方式，提高蛋白的稳定性和活性。并且操作简便，制作周期短，消耗资源少，方便放大生产。

主权项

一种TNFSF15可溶性蛋白的纯化方法，其特征在于：包括如下步骤：(1).IPTG诱导a)将表达菌株划线培养，挑取单克隆，扩增、转接、放大到培养基中，使细菌生长至对数生长期；b)将菌液置于4℃静置30min；c)静置后加入终浓度为50μM的IPTG，16℃，220rpm诱导24h；(2).菌体裂解a)4℃离心收集菌体；b)每200mL菌液加25mL裂解液，用探头，超声1s，暂停1s，30％的功率冰上超声1min，共2次；c)再加入5mL 10％Triton X‑100，同样的时间间隔和功率冰上超声1min，共2次；d)将菌液置于冰上静置30min；e)静置后的菌液4℃离心分离获得裂解上清液；(3).上柱洗脱a)10倍柱体积ddH2O冲洗镍柱，5倍柱体积平衡液平衡镍柱；b)将裂解上清液和Ni‑Agarose以体积比为2:1的比例4℃100rpm充分混合2h；c)将混合好的溶液上柱，4℃收集流出液；d)流出液全部流出后，加入8倍柱体积的清洗液4℃洗涤杂蛋白；e)用4倍柱体积的洗脱液4℃洗脱并收集目的蛋白；(4).除盐分装a)在4℃条件下用透析的方法或者除盐柱，去除产物溶液中的咪唑；b)所得蛋白使用0.22μM滤膜过滤除菌，分装，‑80℃保存。