[发明专利]一种从单环刺螠肾管中提取血栓纤溶酶的方法

摘要

本发明公开了一种从单环刺螠肾管中提取血栓纤溶酶的方法，其通过如下步骤实现一、原材料分离取新鲜单环刺螠，洗净再吸干表面水分，收集肾管冻存后匀浆机搅碎，室温下自然融化，以磷酸盐缓冲液过滤；离心，收集中层液，冷冻干燥，冻品即为粗提物；二、粗品纯化取出粗提物，融化，离心，取中层清液微孔滤膜过滤，收集滤液于葡聚糖凝胶G‑50柱体积的3％上样分离，三蒸水洗脱，收集洗脱液，逐管测定蛋白浓度及酶活力，收集酶活力较高的第一个峰组分，冷冻干燥冻存，即为纯化后的血栓纤溶酶。采用上述方案后，本发明以单环刺螠血栓纤溶酶的主要存在部位‑‑肾管为提取部位，可高效地提取单环刺螠中的血栓纤溶酶，提高单环刺螠的利用率。

主权项

一种从单环刺螠肾管中提取血栓纤溶酶的方法，其特征在于，通过如下步骤实现：一、原材料分离：取新鲜单环刺螠，洗净再吸干表面水分，解剖去除体壁，收集肾管于‑20℃冻存；12h后，取出冻存肾管，匀浆机搅碎，室温下自然融化，以3倍体积0.01mol/L，pH为7.4的磷酸盐缓冲液在4℃条件下300目尼龙网过滤；10h后，以6000rpm/min离心40min，收集中层液，‑80℃冷冻干燥，冻品即为粗提物；二、粗品纯化：取出步骤一所得的粗提物，4℃融化，在4℃下13000rpm/min离心30min，取中层清液用0.45μm微孔滤膜过滤，收集滤液于葡聚糖凝胶G‑50柱体积的3％上样分离，三蒸水洗脱，洗脱速度0.4ml/min，10min/管收集洗脱液，逐管测定蛋白浓度及酶活力，依次出现两蛋白峰，收集酶活力较高的第一个峰组分，冷冻干燥后于‑20℃冻存，即为纯化后的血栓纤溶酶。