[发明专利]一种无防腐剂的注射用马破伤风免疫球蛋白制剂及其制备方法

摘要

本发明涉及一种无防腐剂的注射用马破伤风免疫球蛋白制剂及其制备方法，属于医药技术领域。该制备方法包括提取IgG、消化及加温变性、提取F(ab’)₂、明矾吸附除杂质、超滤、柱层析纯化、原液配制及制剂的制备八大步骤。经本发明工艺制备出的破伤风抗毒素更新换代产品——马破伤风免疫球蛋白F(ab’)₂，规格1500IU/0.75ml/瓶，蛋白含量≤50g/L，制剂不含防腐剂。解决了制品去除防腐剂的关键技术要点——大幅降低制品蛋白含量，降低制品本身易受污染程度。经临床试验验证，本发明的马破伤风免疫球蛋白制剂的不良反应发生率由传统破伤风抗毒素的40～60%下降至10%以下，安全性远远高于传统破伤风抗毒素。

主权项

一种无防腐剂的注射用马破伤风免疫球蛋白制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），提取IgG：常温下操作，马血浆V L，用2V～3V L的质量浓度为0.85%氯化钠水溶液稀释马血浆，得到马血浆稀释液；按马血浆稀释液的体积加入16～18%(m/v)的硫酸铵固体粉末，搅拌至溶解后，静置2～18h，过滤；取滤液，按滤液体积加入13～15%(m/v)硫酸铵固体粉末，接着搅拌至溶解后，静置2～18h，过滤，取沉淀；步骤（2），消化及加温变性：用质量浓度为0.85%氯化钠水溶液溶解步骤（1）得到的沉淀至体积为2V～3V L，用2M盐酸调节pH至2.9～3.3，加入0.06VL胃蛋白酶水溶液，30±1℃保温1.5～2h；所述的胃蛋白酶水溶液浓度为100～170酶单位/ml；之后按步骤（1）得到的沉淀用质量浓度为0.85%氯化钠水溶液溶解后的体积加入14～16%(m/v)硫酸铵固体粉末，搅拌至溶解后，用2M氢氧化钠调节pH至4.9～5.3，58±1℃保温0.5h后降温，待温度降至40℃以下后，过滤，取滤液；步骤（3），提取F(ab’)₂：用2M氢氧化钠调节步骤（2）得到的滤液pH至7.0～7.4，然后按滤液体积加入19～21%(m/v)硫酸铵固体粉末，搅拌至溶解后，静置2～18h，过滤，取沉淀；步骤（4），明矾吸附除杂质：将步骤（3）得到的沉淀用注射用水溶解成2V L，然后加入质量浓度为10%的明矾水溶液0.16V L，用2M氢氧化钠调节pH至7.7～7.9，搅拌1h，过滤，取滤液；步骤（5），超滤：将步骤（4）得到的滤液浓缩至0.4V～0.5V L后，利用截留分子大小为50KD的超滤膜进行超滤，超滤时加入缓冲液使超滤罐中液体体积一直维持在0.4V～0.5V L，至超滤罐中液体中硫酸铵含量≤1.0g/L时超滤结束，然后将超滤罐中的溶液浓缩至溶液蛋白含量65～120g/L，即得到超滤浓缩液；所述的缓冲液中PB浓度为0.02M，NaCl浓度为0.01M，pH为6.8～7.2；步骤（6），柱层析纯化：阴离子交换层析柱依次采用3个柱体积水、3个柱体积1M氢氧化钠溶液、3个柱体积水、8～12个柱体积步骤（5）所述的缓冲液进行冲洗；然后将步骤（5）得到的超滤浓缩液加载至经上述步骤处理后的层析柱中，加载速度为1.0～2.0cm/min，加载完毕用步骤（5）所述的缓冲液冲洗层析柱，当A_280nm紫外吸收值开始快速上升时，收集该层析峰液体，得到马破伤风免疫球蛋白F(ab’)₂溶液；步骤（7），原液配制：将甘氨酸和氯化钠一起加入到注射用水中溶解，得到第一辅料水溶液；将第一辅料水溶液和步骤（6）所得马破伤风免疫球蛋白F(ab’)₂溶液按照体积比为1：10进行混合，混合均匀后，用2M盐酸调节pH至6.0～7.0，除菌过滤后为原液，原液于2～8℃放置稳定；所配制的原液中甘氨酸含量为8～12g/L、氯化钠含量为3.5～6.0g/L；步骤（8），制剂的制备：将甘氨酸和氯化钠一起加入到注射用水中溶解，得到第二辅料水溶液，然后采用第二辅料水溶液对步骤（7）稳定后的原液进行稀释，使马破伤风免疫球蛋白F(ab’)₂的含量为2000000～2400000 IU/L、甘氨酸的浓度为8～12g/L、氯化钠的浓度为3.5～6.0g/L；除菌过滤后，分装，得到无防腐剂的注射用马破伤风免疫球蛋白制剂。