[发明专利]一种固定化生物复合酶催化合成熊果苷的方法

摘要

本发明公开了一种固定化生物复合酶催化合成熊果苷的方法，属于生物催化领域。本发明以白玉蜗牛为原料，提取酶液与纳米凹凸棒土复配制得固定化生物复合酶，用其催化对苯二酚和葡萄糖的合成反应，最终得到熊果苷。该方法工艺简便，不仅利用白玉蜗牛为原料，节约了生产成本，而且操作过程中未使用任何有毒试剂，利用固定化生物复合酶合成熊果酸，反应条件温和，缩短了生产周期，提高了熊果苷的产率，使得大规模生产熊果苷成为了可能。

主权项

 一种固定化生物复合酶催化合成熊果苷的方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）选取20～30只白玉蜗牛放入烧杯中，向烧杯中加水直至水深达到1～2cm，再向水中滴加5～10mL菜籽油，搅拌均匀后静置饥饿处理5～7天，再将处理后的蜗牛取出，去壳解剖取出消化腺；（2）将上述得到的蜗牛消化腺和去离子水按固液比为1:8进行混合后放入超声振荡仪，以200～300W功率超声振荡20～40min，过滤分离去除滤渣，得到滤液，再将滤渣按前述步骤重新操作，分离得到滤液，合并两次滤液；（3）将合并得到的滤液放入高速离心机，以10000～12000r/min转速离心处理10～15min，分离得到上清液，将上清液转入真空浓缩罐，减压至900～1000Pa，浓缩至上清液原体积的1/3，得到粘稠浓缩液；（4）称取40～50g凹凸棒土放入研钵研磨成粉，分别用浓度为0.2mol/L盐酸溶液和0.5mol/L氢氧化钠溶液冲洗1～2h，放入马弗炉于700～800℃下煅烧2～4h，得到表面改性得纳米凹凸棒土；（5）将上述得到的纳米凹凸棒土浸入上述粘稠浓缩液中，放置在摇床上振荡浸渍过夜，再用喷雾干燥机喷雾干燥，得到固定化生物复合酶；（6）按摩尔比为1:3将对苯二酚和葡萄糖混合均匀后装入陶瓷酶解罐中，加入两者总体积1～2倍的正丁醇和两者总质量2～5%上述制得的固定化生物复合酶，放置在摇床上在40～60℃下以200～300r/min转速振荡反应40～50h；（7）将上述得到的反应液通过极性大孔树脂柱进行分离纯化得到流出液，把流出液放入真空干燥箱，在60～70℃和0.05～0.08MPa的条件下干燥结晶，即得白色粉末状熊果苷。