[发明专利]用于体外细胞培养的胎牛血清及其制备方法

摘要

本发明公开了用于体外细胞培养的胎牛血清及其制备方法，制备时采集怀孕母牛的胎牛血液获得血浆，采用含有体积含量4‑6%葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2‑0.6%柠檬酸钠的水溶液、胎牛血液均匀混合、离心分离出血浆；将氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢钾、去离子水混合、调节pH，再加入血浆搅拌均匀、离心分离取上清液、半透膜析出收集半透膜上部残留物；将半透膜上部残留物加入辛酸液调节pH、加入硅藻土、过滤分离，过滤收集上清液即得胎牛血清。本发明制备胎牛血清的工艺简单、易操作，各参数易控制，且保证胎牛血清的性质稳定、生产成本低，胎牛血清纯度高，收率高，制得的胎牛血清极适于体外细胞的培养，适于大规模推广。

主权项

用于体外细胞培养的胎牛血清的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）采集怀孕母牛的胎牛血液获得血浆，具体步骤如下：11）采用含有体积含量4‑6%葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2‑0.6%柠檬酸钠的水溶液进行混合，将上述两者混合后的混合液A置入取血容器内充分滋润容器内壁；12）将胎牛血液置入上述滋润过的取血容器内，摇动使其与胎牛血液均匀混合；13）将混合均匀的含有胎牛血液的混合液B置入采血试管，保持血液在40℃以下恒温状态，然后将采血试管在离心机中以3000‑14000r/min转速旋转5‑30分钟，分离出血浆、血小板、血球，将所得血浆、血小板、血球分别采用采血试管分离存放；14）将已存放血浆的采血试管置入‑20~0℃环境下保存备用；2）将血浆分离提取胎牛血清，具体步骤如下：21）取6‑12g氯化钠、0.1‑0.5g磷酸二氢钾和1.4‑2.4g磷酸二氢钾放入容器中，向其中加入300‑700mL去离子水，搅拌均匀，使用质量分数为10‑20%的盐酸溶液调节pH为7.0‑7.3，将上述所收集的血浆倒入容器中，搅拌均匀，温度设定为25‑38℃，静置8‑20min，得混合液C；22）将上述的混合液C放入离心机中离心分离8‑20min，转速设定为3000‑10000r/min，取上清液，在容器中部安装一半透膜，将上清液倒在半透膜上方，密封，对容器顶部加压至0.8‑2.4MPa，温度设定为38‑47℃，待无液体从半透膜析出时，停止加压，收集半透膜上部残留物备用；23）将半透膜上部残留物按0.3‑10.0%的体积比例加入辛酸液，调节pH至4.0‑7.5，搅拌时间0.3‑5小时；处理完毕，按100ml溶液加入0.3‑1.0g硅藻土，搅拌均匀后，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液即得胎牛血清。