[发明专利]一种分子标签的制备方法

摘要

本发明涉及一种分子标签的制备方法，包括以下步骤：在DNA分子模板的5′接头端引入barcode序列；用DNA聚合酶延伸3′接头端，与barcode序列互补，得到补齐序列；向补齐序列中加入DNA聚合酶，在补齐序列的3′接头端引入胸腺嘧啶，得到改造的接头；将待测DNA破碎成DNA短片段，用DNA连接酶连接DNA短片段与改造的接头，得到DNA连接产物；聚合酶链式反应扩增DNA连接产物，得到扩增产物；对扩增产物进行测序，然后比对到人类参考基因组，在多个DNA模板副本中选取碱基错误率最低的DNA序列，即为分子标签。该分子标签技术通过改变barcode长度，去除固定序列，减少测序中数据的浪费，提高了反应速率，能有效区分DNA扩增过程中的错误和真实的DNA变异。

主权项

1.一种分子标签的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将adapter‑1和adapter‑2均匀混合后进行梯度温度降温退火；所述adapter‑1的序列为5'‑TACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT‑3'；所述adapter‑2的序列为5’‑TCTTCTACAGTCANNNNNNAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC‑3’，其中，序列中的NNNNNN为6bp的随机barcode，N表示A、T、G或C中任何一个碱基；或所述adapter‑2的序列为5’‑TCTTCTACAGTCANNAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC‑3’，其中，序列中的NN为2bp的随机barcode，N表示A、T、G或C中任何一个碱基；(2)用Taq DNA聚合酶延伸3′接头端，与barcode序列互补，得到补齐序列；(3)向步骤(2)得到的所述补齐序列中加入Taq DNA聚合酶，在所述补齐序列的3′接头端引入胸腺嘧啶，得到改造的接头；(4)将待测DNA破碎成DNA短片段，用DNA连接酶连接所述DNA短片段与所述改造的接头，得到DNA连接产物；(5)聚合酶链式反应扩增所述DNA连接产物，得到扩增产物；(6)对所述扩增产物进行测序，然后比对到人类参考基因组，在多个DNA模板副本中选取碱基错误率最低的DNA序列。