[发明专利]组合物及其在CIK细胞培养中的应用

摘要

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及组合物及其在CIK细胞培养中的应用。本发明提供了组合物及其在CIK细胞培养中的应用，以本发明提供的组合物配合本发明提供的培养方法，能够提高CIK细胞的得率，且其中CD3+CD56+双阳性细胞的比例较高。实验表明，本发明提供的组合物和培养方法对单个核细胞进行诱导，能够将细胞的总数从诱导前的5×107提高至8.9×109，且CD3+CD56+双阳性细胞的比例为36.1％，该效果显著优于单独使用IL‑2(p<0.05)。

主权项

1.一种CIK细胞的培养方法，其特征在于，包括：使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞PBMCs；将分离好的PBMCs经过细胞计数后，用无血清培养基稀释到2×106cell/ml，接种到T-75培养瓶中，加入1000U/ml的rhIFN-r，在37℃、5％CO2细胞培养箱中培养24小时，这一天定为第0天；接下来分别在培养的第1、3、5、7天补充含有50ng/ml CD3单克隆抗体、500U/ml IL-2，250ng/ml IL-15、500U/ml IL-12的淋巴细胞培养基，使得细胞密度在1×106cell/ml，在37℃、5％CO2细胞培养箱中培养；在培养的第7天，将补充完培养基后的细胞转移到1.8L细胞培养袋中进行培养；分别在培养的第9、11、13天补充含有500U/ml IL-2、250ng/ml IL-15、500U/ml IL-12的淋巴细胞培养基，使得细胞密度在1×106cell/ml，在37℃、5％CO2细胞培养箱中培养；第15天收集细胞进行检测。