[发明专利]一种对细胞内活性氧含量的检测方法

摘要

本发明公开了一种对细胞内活性氧含量的检测方法，该方法能够得到不同浓度下暴露污染物对应的单个活细胞的DCF荧光信号值。本发明对细胞内活性氧含量的检测方法检测结果精确，克服了由于污染物暴露导致细胞数量变化从而使最终荧光强度测量不准确的问题，本发明检测方法能够真实反映在某个浓度下对应的单个细胞荧光信号值，从而能够真实准确反映污染物暴露对细胞的损伤，为体外细胞模型在污染物毒性评价中的应用打下了更为扎实的基础。

主权项

一种对细胞内活性氧含量的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：，步骤1，选择人肝癌细胞株HepG2作为试验用细胞株，并对试验用细胞株进行消化吹打处理形成细胞悬液；步骤2，用血球计数板测定细胞悬液中的细胞密度，以每孔10000个细胞的密度将细胞种入96孔板中；步骤3，种板24h后，对细胞进行染毒暴露，将不同浓度的暴露污染物分别加入不同的孔板中；步骤4，染毒24h后，将每个孔板中原有培养基采用50μL DCF孵育液替换，于37℃下孵育25min，孵育后用PBS缓冲液清洗，采用酶标仪检测各孔板内细胞的DCF荧光信号值；步骤5，再向每个孔板加入100μL Red Dot 1孵育液，于37℃下孵育15～30min，孵育后用PBS缓冲液洗涤，采用酶标仪检测各孔板内细胞的Red Dot 1荧光信号值，得到每个孔板中活细胞的数量；步骤6，将步骤4得到的每个孔板中的DCF荧光信号值除以对应孔板中细胞的Red Dot 1荧光信号值，得到不同暴露污染物浓度下对应单个活细胞的DCF荧光信号值。