[发明专利]高效育成黄鳝雄性四倍体纯系的方法

摘要

本发明公开了一种高效育成黄鳝雄性四倍体纯系的方法，包括如下步骤：他莫昔芬抑制剂配备、他莫昔芬注射液的配制、注射处理母本、冷休克+静水压处理、雌激素抑制剂溶液的配制、黄鳝雄性四倍体纯系的获得。通过本发明的方法，可获得100%的黄鳝雄性四倍体纯系，而且提高了四倍体的育成率与出苗率，同时与杂交相比，能获得纯度更高、后代更为稳定的雄性四倍体鱼系，为获得不育三倍体黄鳝奠定了坚实的基础。

主权项

高效育成黄鳝雄性四倍体纯系的方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬抑制剂配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入90%的乙醇溶液进行溶解，制成母液，其中他莫昔芬含量约为100～120mg/ml，待用；（2）他莫昔芬注射液的配制：取上述母液直接加入到已配制好的催产剂溶液中，其比例为1ml他莫昔芬母液加入到250～500ml的已配制好的催产剂溶液中，制成注射液待用；催产剂溶液是由绒毛膜促性腺激素、脑垂体经过0.9%生理盐水稀释配制，催产剂溶液中绒毛膜促性腺激素的剂量为5‑10 IU/g、脑垂体的剂量为0.1‑0.2mg/g；（3）注射处理母本：在母本人工产卵前，按常规人工催产方法对母本进行人工注射他莫昔芬注射液，其中他莫昔芬注射液的用量约为100～300μg/kg，即每kg母本注射100‑300μg他莫昔芬注射液；（4）冷休克+静水压处理：在一次卵裂时，采用冷休克与静水压相结合的方法，把经过注射处理的母本与不经过任何处理的父本杂交获得的受精卵放入温度为‑1～1.0℃的冷水中，静水压压力为250～340Kg/cm²，持续时间为3～5min；（5）雌激素抑制剂溶液的配制：将氯米芬和睾酮一起溶于80%～90%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为150～350mg/l，睾酮的浓度为60～140mg/l；（6）取步骤（4）处理后的受精卵放入按步骤（5）所制备的雌激素抑制剂溶液中，常温浸泡10～30s，然后取出放于孵化器中正常孵化；从而获得100%黄鳝雄性四倍体纯系。