[发明专利]一种精品肝素钠的制备方法

摘要

本发明公开了一种精品肝素钠的制备方法，属于肝素钠制备技术领域。本发明将膨胀珍珠岩负载复合酶得到自制酶制剂，用其预处理粗品肝素钠，再经过氧化氢一次氧化即可制得精品肝素钠。实例证明，本发明方法独特新颖，不仅避免了传统精制方法中副产物的产生，从最大程度降低了产品活性损失，且简化了精制步骤，有效提高了精品肝素钠的效价和效价回收率，使得效价可达160～170u/mg，回收率达到98％以上。

主权项

一种精品肝素钠的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）称取40～50g膨胀珍珠岩分别用浓度为0.5mol/L硫酸溶液和0.3mol/L氢氧化钠溶液浸泡3～5h，移入布氏漏斗抽滤洗涤20～30min，得到表面改性的膨胀珍珠岩；（2）按质量比为5:3:1将胰蛋白酶、碱性蛋白酶和脂肪酶混合后加入三者总体积3～5倍的去离子水，搅拌均匀后转入真空浓缩罐，在900～1000Pa压力下浓缩至其原体积的1/2得复合酶液，按固液比为1:3将上述表面改性的膨胀珍珠岩浸入复合酶液，放入超声振荡仪以200～300W功率振荡浸渍过夜；（3）浸渍结束后过滤分离得到滤渣，用真空冻干机在‑40～‑30℃下冻干后即得自制固定化复合酶制剂；（4）称取1～2kg粗品肝素钠溶于其体积3～5倍质量浓度为3%氯化钠溶液中，搅拌10～20min后过滤去除滤渣得滤液，将得到的滤液装入陶瓷酶解罐中，再加入滤液总质量5～10%上述自制固定化复合酶制剂，用浓度为0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.5～8.5，常温酶解5～6h后过滤去除滤渣得无蛋白酶解液；（5）向上述无蛋白酶解液中加入其体积1/10质量浓度为30%过氧化氢溶液，在20～25℃下静置氧化处理10～12h后过滤分离得到氧化液，向氧化液中加入其体积1～2倍的无水乙醇，放入4～6℃的冰水浴中静置沉淀6～8h，用卧式离心机以3000～5000r/min转速离心分离后得下层沉淀，真空干燥后即得精品肝素钠。