[发明专利]基于FTA卡从粪便中提取隐孢子虫卵囊DNA的方法

摘要

本发明属于分子生物学领域，涉及一种基于FTA卡提取DNA的方法，具体涉及一种基于FTA卡从粪便中提取隐孢子虫卵囊DNA的方法。提取步骤如下：收集经隐孢子虫卵囊感染成功后的犊牛粪便，获得隐孢子虫卵囊，定量污染粪便；将奶牛粪便涂抹于FTA卡上，常温晾干FTA卡，打孔获得FTA圆片；将获得的FTA圆片分别放入离心管内，去污并清洗，加入FTA卡清洗液，室温孵育后加入1×TE溶液，室温孵育，将清洗后的FTA圆片完全干燥，完成粪便中隐孢子虫卵囊DNA的提取。本发明只需携带FTA卡到养殖场采集粪便样本，经FTA洗脱液和其他有机溶液清洗后，可将FTA卡片用作DNA模板进行PCR扩增，成本低廉，方便快捷。

主权项

基于FTA卡从粪便中提取隐孢子虫卵囊DNA的方法，其特征在于：所述提取步骤如下：（1）收集经隐孢子虫卵囊感染成功后的犊牛粪便，粪便经纯化沉淀后，获得隐孢子虫卵囊，经血细胞计数板计数，记录卵囊浓度；（2）定量污染粪便，将步骤（1）获得的卵囊倍比稀释成1×10^‑1/mL‑1×10⁵/mL个卵囊，取倍比稀释后的卵囊悬液1mL，均匀混入1g经检测后为隐孢子虫阴性的奶牛粪便中；（3）将步骤（2）中的奶牛粪便涂抹于FTA卡上，常温晾干FTA卡，用单孔打孔器，在载有隐孢子虫阳性粪便样品的FTA卡上打孔，取得直径2mm的FTA圆片；（4）将步骤（3）中获得的FTA圆片分别放入2mL离心管内，加去污剂煮沸5min，除去污剂溶液后加无水乙醇清洗5min，期间数次轻微震荡，然后除去无水乙醇；（5）加入300μL FTA卡清洗液，室温孵育5min，加入500μL1×TE溶液，室温孵育5min；（6）重复步骤（5）一次；（7）将清洗后的FTA圆片室温放置1小时或在56^oC温箱中10min，至FTA圆片完全干燥，完成粪便中隐孢子虫卵囊DNA的提取。