[发明专利]一种GII.P12/GII.3重组型诺如病毒基因组扩增引物和扩增方法

摘要

本发明公开了一种GII.P12/GII.3重组型诺如病毒基因组扩增引物和扩增方法。本发明分别以六对扩增引物作为扩增引物的上下游引物，以GII.P12/GII.3重组型诺如病毒的RNA为模板进行RT‑PCR扩增，分别得到扩增产物，然后采用以上六对扩增引物以及两条测序引物II.12‑Seq1R、II.3‑Seq6F对扩增产物进行核酸序列测序，然后再拼接比对，得到GII.P12/GII.3重组型诺如病毒基因组全长序列。本发明针对我国常见的一种GII.P12/GII.3重组型诺如病毒，根据其基因组所包含的三个开放阅读框设计了“4+1+1”的分段扩增策略，根据保守区域设计相应的扩增引物，将该扩增引物应用于实际检出样本，获得了GII.P12/GII.3重组型诺如病毒基因组序列。本发明可广泛应用于医疗卫生、检验检疫等有诺如病毒检测需求及相关科研领域。

主权项

一种GII.P12/GII.3重组型诺如病毒基因组扩增引物，其特征在于，包括六对扩增引物和两条测序引物：引物对1：II‑1F：5'‑GTGAATGAAGATGGCGTCTAAC‑3'；II.12‑1R：5'‑TCAACRCCATTGCGMGGGAT‑3'；引物对2：II.12‑2F：5'‑TGGGCACAATCAACGCTCT‑3'；II.12‑2R：5'‑ATGGCCACCTCCTCATAATA‑3'；引物对3：II.12‑3F：5'‑ATTGCTGGAGCTGCATTTGT‑3'；II.12‑3R：5'‑GCCAATTTKCCTGTRAAGGA‑3'；引物对4：II.12‑4F：5'‑CCAAGTGTGTTAGAGGCTGC‑3'；II‑4R：5'‑CCRCCNGCATRHCCRTTRTACAT‑3'；引物对5：II‑5F：5'‑GGAGGGCGATCGCAATC‑3'；II‑5R：5'‑CCRGCRAAGAAAGCTCCAGCCAT‑3'；引物对6：II.3‑6F：5'‑GGTATGTCAACCCTGACACT‑3'；II.3‑6R：5'‑CACTAAACATTTGACTCC‑3'；测序引物：II.12‑Seq1R：5'‑CAGAAGGCATAGCAGTTGTT‑3'；II.3‑Seq6F：5'‑TGGAACCACACATGCCT‑3'；R代表A/G，M代表A/C，K代表G/T，H代表A/C/T，N代表A/C/T/G。