[发明专利]一种提高酸性脲酶热稳定性的方法有效
| 申请号： | 201610512679.1 | 申请日： | 2016-07-01 |
| 公开（公告）号： | CN105950597B | 公开（公告）日： | 2019-12-24 |
| 发明（设计）人： | 康振;陈坚;堵国成;刘庆涛;周建立 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/80 | 分类号： | C12N9/80;C12N15/74 |
| 代理公司： | 23211 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 | 代理人： | 耿晓岳 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提高酸性脲酶热稳定性的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过融合酸性脲酶结构基因，获得了最适温度降低,由70℃降解到60℃,而热稳定性提高的脲酶突变体。在70℃加热30min,脲酶残留活力由80％提高到96％。本发明首次提出，通过融合酸性脲酶结构基因UreA、UreB、UreC的方法来提高酸性脲酶热稳定性的策略，并且获得了热稳定性提高的酸性脲酶，更有利于酸性脲酶的工业化应用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 酸性 脲酶 热稳定性 方法 | ||
【主权项】：
1.一种提高酸性脲酶热稳定性的方法，其特征在于，将酸性脲酶结构基因UreA、UreB融合，插入重组表达载体pNZ8148-ureLR并进行表达，得到的融合片段UreAB替换质粒pNZ8148-ureLR的完整脲酶基因簇UreLR中的原有的UreA和UreB基因，然后进行表达；所述酸性脲酶结构基因通过连接肽进行融合，所述连接肽序列为GGGGGGGS；所述UreA与UreB融合后的基因片段UreAB序列如SEQ ID NO.4所示；/n所述酸性脲酶结构基因UreA序列如SEQ ID NO.1所示，结构基因UreB序列如SEQ IDNO.2所示；所述pNZ8148-ureLR的构建方法为将酸性脲酶基因序列GenBank:AAPZOZ000001.1,GI:194454092-19445409，连接到载体pNZ8148中得到。/n
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