[发明专利]一种双曲线定标定量免疫层析检测方法

摘要

本发明涉及生物医疗检测技术领域，具体而言，涉及一种双曲线定标定量免疫层析检测方法，包括：将待检物样品与梯度稀释后的待检物标准品分别与等量反应物进行反应并测定表征反应强度的信号值；以待检物浓度为横坐标、信号值强度为纵坐标建立坐标系，将不同浓度的待检物标准品对应的信号值代入并绘制拟合曲线，并于曲线拐点处将所述拟合曲线分为两段，对应较低待检物浓度的为前定标曲线，对应较高待检物浓度的为后定标曲线；根据对照线上的信号强度对待检物样品含量进行预估，再将其对应的信号值代入不同的曲线即可得知其确切的蛋白浓度。该方法在无需稀释待检物样品的前提下对待检物样品进行定量分析检测，适用于珍贵样品或大批量样品的检测。

主权项

1.一种双曲线定标定量免疫层析检测方法，其特征在于，包括：将不同浓度的待检物的标准品分别与等量反应物进行反应并测定表征反应强度的信号值；以待检物浓度为横坐标、信号值强度为纵坐标建立坐标系，将不同浓度的待检物标准品对应的信号值代入并绘制拟合曲线，并于曲线拐点处将所述拟合曲线分为两段，对应较低待检物浓度的为前定标曲线，对应较高待检物浓度的为后定标曲线；当于曲线拐点处将所述拟合曲线分为两段得到前定标曲线和后定标曲线后，还包括：对所述前定标曲线和后定标曲线重新进行拟合；拟合得到的曲线的线性相关系数大于等于0.990；判断待检物样品含量与反应物含量之间的关系并将待检物样品与等量反应物进行反应；所述反应物预先包被在试纸条上；所述试纸条上还设置有结合垫、检测线和对照线；当待检物为抗原时：所述结合垫上包被有能与所述待检物结合的第一抗体，且所述第一抗体标记有胶体金或荧光标记物；所述检测线上固定包被有第二抗体，且所述第二抗体与所述第一抗体结合的抗原表位不同；所述对照线上固定包被有待检物；当待检物为抗体时：所述结合垫上包被有能与所述待检物结合的抗体，且所述抗体标记有胶体金或荧光标记物；所述检测线上固定包被有能与所述待检物结合的抗原；所述对照线上固定包被有待检物；或；所述结合垫上包被有能与所述待检物结合的抗原，且所述抗原标记有胶体金或荧光标记物；所述检测线上固定包被有能与所述待检物结合的抗体；所述对照线上固定包被待检物；除测定表征反应强度的信号值外，所述方法还包括测定对照线上的信号值；进行双曲线应用之前，还包括以对照线上的信号值为参考判断出现钩状效应的类型，判断方法为：若当待检物样品对应的对照线上的信号值大于等于拐点浓度对应的对照线上的信号值，则代表反应物过量；若当待检物样品对应的对照线上的信号值小于拐点浓度对应的对照线上的信号值，则代表待检物样品过量；当待检物样品含量小于反应物含量时，将所述待检物样品对应的表征反应强度的信号值代入前定标曲线计算所述待检物样品浓度；当待检物样品含量大于反应物含量时，将所述待检物样品对应的表征反应强度的信号值代入后定标曲线计算所述待检物样品浓度。