[发明专利]石斛原球茎多糖的提纯方法

摘要

本发明提供一种石斛提取方法，具体涉及一种石斛原球茎多糖的提纯方法,该方法采用超声波强化提取手段、运用层析法对石斛原球茎水溶性粗多糖进行分离和纯化，从而获得石斛原球茎多糖的纯品,包括石斛原球茎多糖DCPP超声提取的步骤及石斛原球茎多糖分离纯化的步骤。

主权项

石斛原球茎多糖的提纯方法，其特征在于：包括石斛原球茎多糖DCPP超声提取的步骤及石斛原球茎多糖分离纯化的步骤：所述石斛原球茎多糖DCPP超声提取的步骤包括：1）干燥粉碎：取石斛干燥茎，55~65℃真空干燥2h，并对干燥后的石斛干燥茎进行粉碎，粉碎后过70~90目筛，得到石斛粉；2）超声水浴提取：按料液比1：30~35的比例将石斛粉和纯水混合后，置不锈钢圆筒进行超声波水浴加热提取，提取温度40~55℃，提取时间85~100min，超声波频率40~50kHz，超声功率恒定为280‑320W，得到的提取液；3）离心浓缩处理：将得到的提取液进行离心去渣，取上清液用旋转蒸发仪进行浓缩处理，再用4倍体积95%乙醇沉淀7~9h，取出沉淀物用适量纯水溶解，14500~15500r/min离心8~12min，倒去上清，得到离心沉淀物；4）冻干保存：对离心得到的沉淀物进行冻干保存，即得到石斛原球茎粗多糖；所述石斛原球茎多糖分离纯化的步骤包括：1）石斛原球茎粗多糖的柱分离：用纯水将冻干的粗多糖DCPP配成质量浓度约18~22g/L的水溶液，离心，进DEAE‑52纤维素柱分离，每次上样量为9~11mL，得到5种多糖组分DCPP1a，DCPP2b，DCPP3c，DCPP4d，DCPP5e；2）洗脱并制定洗脱分制图：先以纯水充分洗脱中性多糖，随后分别以浓度为0.05、1.0、2.0mol/L的NaCl相继分段梯度洗脱，洗脱速率为0.5mL/min,，以每管5mL收集洗出液，用苯酚‑硫酸法于470~510nm处显色测定多糖峰位的吸光值，依有关数据制定多糖的洗脱分布图；3）合并、浓缩、透析、醇沉、冻干洗脱液：合并主要糖组分的洗脱液，将其浓缩，装入透析袋夹紧，在流水和蒸馏水中分别透析48、24h,醇沉、冻干后得到5个组分DCPP1a，DCPP2b，DCPP3c，DCPP4d，DCPP5e；4）SephadexG‑200柱分离纯化：接着用SephadexG‑200柱分离纯化，以0.02mol/LNaCl溶液洗脱，流速0.3~0.4mL/min，以每管2.5~3.5mL分别收集各峰对应组分的洗脱液，收集各峰，经透析、浓缩、醇沉、洗涤、冻干得多糖DCPP，最后进行多糖纯度鉴定。