[发明专利]一种电化学发光夹心生物传感器及制备与应用

摘要

本发明涉及一种电化学发光夹心生物传感器及其制备与应用，包括以下步骤：先采用恒电位法制备金纳米‑石墨烯修饰的玻碳电极；再制备Ru(bpy)₃²⁺标记的信标Ru‑TBA2‑AuNPs；将金纳米‑石墨烯修饰的玻碳电极浸入含有巯基修饰的TBA1溶液中培育2～8 h，然后在含有凝血酶溶液中培育20 min；最后在Ru‑TBA2‑AuNPs中培育20 min。本发明的电化学发光夹心生物传感器主要应用于凝血酶的检测。本发明的传感器具有良好的稳定性、重现性、对凝血酶具有很强的特异性，不易受到检测样品中其他物质的干扰；灵敏度高、检测快速、操作简便等特点。对凝血类药物的研发有一定的帮助。

主权项

1.一种电化学发光夹心生物传感器的制备方法，其特征在于，主要包括以下步骤：(S1)采用恒电位法制备金纳米‑石墨烯修饰的玻碳电极；(S2)采用柠檬酸还原氯金酸法制备AuNPs；(S3)用Ru(bpy)2(dcbpy)NHS标记TBA2并溶解于PBS溶液中，得到Ru‑TBA2信标；(S4)将步骤(S3)所得Ru‑TBA2信标用TCEP和pH为5.2的醋酸盐缓冲溶液预处理1h；(S5)将步骤(S2)所得AuNPs加入用NaOH处理过的玻璃瓶中，再加入步骤(S4)所得Ru‑TBA2，在室温遮光下培育16h后加入pH为8.2的Tris‑醋酸盐缓冲溶液和NaCl，继续在温室遮光下培育24h；离心除去多余的Ru‑TBA2；把得到的Ru‑TBA2‑AuNPs溶解到PBS缓冲溶液中；(S6)将所述步骤(S1)所得到金纳米‑石墨烯修饰的玻碳电极浸入含有巯基修饰的TBA1溶液中培育2～8h，然后在含有凝血酶溶液中培育20min；最后在步骤(S5)所得Ru‑TBA2‑AuNPs中培育20min；其中，所述巯基修饰的TBA1序列为5’‑SH‑(CH2)6‑TTTTTGGTTGGTGTGGTTGG‑3’；所述Ru‑TBA2信标的序列为5’‑SH‑(CH2)6‑TTTTTTTTTTTTTTTAGTCCGTAGGGCAGGTGGGGGG TGACTT‑(CH2)6‑NH2‑3’。