[发明专利]一种microRNA‑133a的快速检测方法

摘要

本发明涉及一种microRNA‑133a的快速检测方法，属于生物检测技术领域，该microRNA‑133a的快速检测方法根据待测靶标microRNA‑133a的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列，而后在单链DNA序列两端分别修饰荧光基团和荧光淬灭基团，从而获得与待测靶标microRNA‑133a相对应的Taqman探针，而后将患者血清、RNase‑free水、DSN酶、Taqman探针和RNA酶抑制剂按照一定的比例在特定的条件下进行反应，在激光的激发作用下，检测出反应液的荧光强度，即得到待测靶标microRNA‑133a的检测结果，该检测方法大大缩短了心肌损伤标志物microRNA‑133a的检测时间，在保证检测质量的基础上，提高了检测效率。

主权项

一种microRNA‑133a的快速检测方法，其特征在于，包括：备料：准备好患者血清、RNase‑free水、浓度为18uM/uL的RNA酶抑制剂以及浓度为0.18uM/uL的DSN酶；设计探针：根据待测靶标microRNA‑133a的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列，而后在所述单链DNA序列两端分别修饰荧光基团和荧光淬灭基团，获得浓度为200nmol/uL的Taqman探针；反应：将所述患者血清、所述RNase‑free水、所述DSN酶、所述Taqman探针和所述RNA酶抑制剂按照100:278:2:20:1的配比进行混合，在85℃的反应温度下反应25分钟；检测：根据相应Taqman探针设置反应所需的激发波长和发射波长，使用全自动酶标仪检测反应步骤中的反应液的荧光强度，即得到所述患者血清中的microRNA‑133a的检测结果；其中，与所述microRNA‑133a完全互补的单链DNA序列为：CAG CTG GTT GAA GGG GAC CAAA。