[发明专利]一种microRNA‑499的快速检测方法在审
| 申请号： | 201610526077.1 | 申请日： | 2016-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN106148519A | 公开（公告）日： | 2016-11-23 |
| 发明（设计）人： | 韩志君;高明珠;黄红宇 | 申请（专利权）人： | 无锡市第二人民医院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司 11429 | 代理人： | 袁粉兰 |
| 地址： | 214002*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种microRNA‑499的快速检测方法，属于生物检测技术领域，该microRNA‑499的快速检测方法根据待测靶标microRNA‑499的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列，而后在单链DNA序列两端分别修饰荧光基团和荧光淬灭基团，从而获得与待测靶标microRNA‑499相对应的Taqman探针，而后将患者血清、RNase‑free水、DSN酶、Taqman探针和RNA酶抑制剂按照一定的比例在特定的条件下进行反应，在激光的激发作用下，检测出反应液的荧光强度，即得到待测靶标microRNA‑499的检测结果，该检测方法大大缩短了心肌损伤标志物microRNA‑499的检测时间，在保证检测质量的基础上，提高了检测效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 microrna 499 快速 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种microRNA‑499的快速检测方法，其特征在于，包括：备料：准备好患者血清、RNase‑free水、浓度为18uM/uL的RNA酶抑制剂以及浓度为0.18uM/uL的DSN酶；设计探针：根据待测靶标microRNA‑499的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列，而后在所述单链DNA序列两端分别修饰荧光基团和荧光淬灭基团，获得浓度为200nmol/uL的Taqman探针；反应：将所述患者血清、所述RNase‑free水、所述DSN酶、所述Taqman探针和所述RNA酶抑制剂按照100:278:2:20:1的配比进行混合，在85℃的反应温度下反应25分钟；检测：根据相应Taqman探针设置反应所需的激发波长和发射波长，使用全自动酶标仪检测反应步骤中的反应液的荧光强度，即得到所述患者血清中的microRNA‑499的检测结果；其中，与所述microRNA‑499完全互补的单链DNA序列为：TTAAAC ATC ACT GCAAGT CTT AA。
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