[发明专利]利用植物乳杆菌发酵没食子酸制备焦性没食子酸的方法

摘要

利用植物乳杆菌发酵没食子酸制备焦性没食子酸的方法，以没食子酸为原料，通过液态发酵技术制备焦性没食子酸。包括培养基配制、菌种培养、发酵制酶、发酵脱羧、产物分离等步骤。在发酵温度37℃、底物浓度10 mM，发酵液起始pH 6.5，发酵24 h后植物乳杆菌发酵没食子酸产焦性没食子酸收率大于80%。本发明所述微生物发酵法制备焦性没食子酸与传统法高温脱羧工艺相比，反应条件温和、污染少、得率高、对设备要求不高。

主权项

1.一种利用植物乳杆菌发酵没食子酸制备焦性没食子酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）菌种培养：配制试管斜面保藏培养基和种子培养基，将植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）进行划线分离，挑选生长旺盛的典型菌落在试管斜面保藏培养基上培养；将培养好的斜面菌种以无菌操作取两环，转接到装有种子培养基的摇瓶中，摇床培养，培养温度37℃，转速180 r/min，培养时间10~20 h；所述试管斜面保藏培养基的配制：称取酵母粉10.0 g，葡萄糖15.0 g、碳酸钙 15.0 g、吐温80 1.0 g、琼脂20.0 g，在1 L容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，pH值调至6.5‑7.0，在121℃下灭菌20 min，冷却后即为试管保藏培养基；种子培养基的配制：称取蛋白胨10.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母浸提物10.0 g、葡萄糖20.0 g、吐温80 1.0 g、柠檬酸胺2.0 g、醋酸钠5.0 g、碳酸钙20.0 g、硫酸镁0.1 g、硫酸锰0.05 g、磷酸氢二钾2.0 g，在1 L容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，pH值调至6.5‑7.0，在121℃下灭菌15 min，冷却后为种子培养基；（2）发酵脱羧：配制发酵培养基，将培养好的种子液按照5%接种量，转接到发酵培养基中，摇床发酵；发酵条件：转速180 r/min，底物浓度5‑30 mM，发酵温度30‑40℃、发酵液起始pH值6.0‑7.0，发酵时间20‑28 h；发酵培养基的配制：称取蛋白胨10.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母浸提物5.0 g、葡萄糖20.0 g、吐温80 1.0 g、柠檬酸胺2.0 g、醋酸钠5.0 g、硫酸镁0.1 g、硫酸锰0.05 g、磷酸氢二钾2.0 g，在1 L容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，pH值调至6.5‑7.0，在121℃下灭菌15 min，冷却后为发酵培养基；（3）产物分离：将含有焦性没食子酸的发酵液于10000 r/min条件下离心10 min，取上清液，加入上清液1/2体积的乙酸乙酯，充分混匀后萃取两次，乙酸乙酯相于40℃下经减压蒸发除去溶剂得到焦性没食子酸。