[发明专利]一种高纯度尿促卵泡素的制备方法有效
| 申请号： | 201610528438.6 | 申请日： | 2016-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN106117342B | 公开（公告）日： | 2020-01-03 |
| 发明（设计）人： | 万偲;魏超娟;徐富勇;黄优生;胡著阳;李菊根 | 申请（专利权）人： | 江西浩然生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/59 | 分类号： | C07K14/59;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/18 |
| 代理公司： | 11297 北京睿博行远知识产权代理有限公司 | 代理人： | 龚家骅 |
| 地址： | 330000 江西省南*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 本发明提供一种高纯度尿促卵泡素（urine Follicle Stimulating Hormone，u‑FSH）的制备方法，该制备方法包括以下步骤：(1)人绝经期促性腺激素（Human Menopausal Gonadotropin，HMG）粗制品经过阴离子交换层析纯化，得到尿促卵泡素中间体I；(2)尿促卵泡素中间体I经过阳离子交换层析纯化，得到尿促卵泡素中间体II；(3)尿促卵泡素中间体II经过染料亲和层析纯化，得到尿促卵泡素中间体III；(4)尿促卵泡素中间体Ⅲ经过疏水层析纯化，得到高纯度尿促卵泡素。本方法具有操作简便、生产成本低，获得的尿促卵泡素中卵泡刺激素（Follicle Stimulating Hormone，FSH）纯度更高，黄体生成素（Luteotropic Hormone，LH）含量更低，无外源蛋白污染的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 纯度 卵泡 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种高纯度尿促卵泡素的制备方法，其特征在于，该制备方法为：/n(1)人绝经期促性腺激素(Human Menopausal Gonadotropin，HMG)粗制品经过阴离子交换层析纯化，得到尿促卵泡素中间体I；包括以下步骤：用水溶解HMG粗制品，调节溶液的pH值至5.5-8.0；将HMG溶液上样至已平衡好的阴离子交换层析柱；以pH值为5.5-8.0的0.02M PB溶液洗涤，并检测洗涤液在280nm处的吸光值，直至吸光值不再下降；以pH值为5.5-8.0的含0.05-0.2M NaCl的0.02M PB溶液洗脱，并检测洗脱液在280nm处的吸光值，直至吸光值不再下降，所得洗脱液即为尿促卵泡素中间体I；所述阴离子交换层析柱为CaptoDEAE阴离子交换层析柱；/n(2)尿促卵泡素中间体I经过阳离子交换层析纯化，得到尿促卵泡素中间体II；包括以下步骤：将尿促卵泡素中间体I的溶液上样至已平衡好的阳离子交换层析柱；以pH值为4.0-5.5的0.1M醋酸-醋酸钠(HAc-NaAc)溶液洗涤，并检测洗涤液在280nm处的吸光值，直至吸光值不再下降；再用pH值为4.0-5.5的含0.1-0.5M NaCl的0.1M HAc-NaAc溶液洗脱，并检测洗脱液在280nm处的吸光值，直至吸光值不再下降，所得洗脱液即为尿促卵泡素中间体II；所述阳离子交换层析柱为CM-Sepharose阳离子交换层析柱；/n(3)尿促卵泡素中间体II经过染料亲和层析纯化，得到尿促卵泡素中间体III；包括以下步骤：将尿促卵泡素中间体II的溶液上样至已平衡好的染料亲和层析柱；以pH值为6.0-9.0的0.1M NaAc溶液洗涤，并检测洗涤液在280nm处的吸光值，直至吸光值不再下降；再以pH值为8.0-10.0的含0.8-2.5M KCl的0.02M PB溶液洗脱，并检测洗脱液在280nm处的吸光值，直至吸光值不再下降，所得洗脱液即为尿促卵泡素中间体III；所述染料亲和层析柱为Capto Blue high sub染料亲和层析柱；/n(4)尿促卵泡素中间体Ⅲ经过疏水层析纯化，得到高纯度尿促卵泡素的溶液；包括以下步骤：将尿促卵泡素中间体III的溶液上样至已平衡好的疏水层析柱；用pH值为7.0-9.0的含有1.0-1.5M(NH
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