[发明专利]制备无融合标签包涵体蛋白纳米颗粒的方法有效
| 申请号： | 201610529226.X | 申请日： | 2016-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN106148374B | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 熊思东;齐兴梅 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/62 |
| 代理公司： | 32257 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 冯瑞 |
| 地址： | 215000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种制备无融合标签包涵体蛋白纳米颗粒的方法，包括以下步骤：将自发断裂蛋白质内含子的C端与目的蛋白基因融合，N端与增强目的蛋白表达的标签蛋白融合，得到融合蛋白编码基因；将融合蛋白编码基因在大肠杆菌中诱导表达，通过自发断裂蛋白质内含子的C端自发断裂，释放所述目的蛋白，形成包涵体蛋白；将大肠杆菌细胞破碎，离心，弃掉上清液，得到无融合标签包涵体蛋白纳米颗粒。本发明解决了在包涵体蛋白颗粒水平上实现标签蛋白的移除，填补了制备无标签包涵体蛋白纳米颗粒的技术空白，并且蛋白质内含子的自发断裂在大肠杆菌体内完成，后处理简单。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 融合 标签 包涵 蛋白 纳米 颗粒 方法 | ||
【主权项】：
1.一种制备无融合标签包涵体蛋白纳米颗粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将断裂型蛋白质内含子Ssp DnaX mini-intein的138个氨基酸的C端与目的蛋白基因融合，所述断裂型蛋白质内含子的N端与增强目的蛋白表达的标签蛋白融合，得到融合蛋白编码基因；所述断裂型蛋白质内含子Ssp DnaX mini-intein的138个氨基酸的C端氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述标签蛋白为硫氧还蛋白基因；所述目的蛋白为柯萨奇病毒3型VP1蛋白；/n(2)将所述融合蛋白编码基因在大肠杆菌中诱导表达，通过所述断裂型蛋白质内含子的C端自发断裂，释放所述目的蛋白，形成包涵体蛋白；/n(3)将大肠杆菌细胞破碎，离心，弃掉上清液，得到所述无融合标签包涵体蛋白纳米颗粒。/n
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