[发明专利]猫儿屎的离体培养方法

摘要

本发明公开了一种以未成熟果实的种胚作为外植体，依次经过愈伤组织的诱导、不定芽分化诱导、不定芽增殖培养和生根诱导培养获得猫儿屎再生植株。在进行愈伤组织的诱导之前，还包括：外植体的灭菌：取猫儿屎幼嫩果实，首先在每100ml含6‑10滴的洗洁净液中浸泡20‑30min后刷洗表面，之后用水冲洗1‑2h，然后在无菌环境中先用75％的酒精灭菌处理幼嫩果实30‑60s，之后用每100ml含3‑4滴土温40的0.1％HgCl₂溶液对其灭菌15min，再用无菌水清洗4‑6次，每次1‑3min，最后取出幼嫩种子，挤出幼嫩种胚，使用无菌水漂洗幼嫩种胚后获得外植体。本发明方法可高频率地诱导出大量的猫儿屎丛生不定芽，移栽成活率高。本发明为提高猫儿屎的繁殖系数、为该物种的种质保存及其推广应用奠定了良好的基础。

主权项

1.一种猫儿屎的离体培养方法，其特征在于，包括：以未成熟果实的种胚作为外植体，依次经过愈伤组织的诱导、不定芽分化诱导、不定芽增殖培养和生根诱导培养获得猫儿屎再生植株；在进行愈伤组织的诱导之前，还包括：外植体的灭菌：取猫儿屎幼嫩果实，首先在每100ml含6‑10滴的洗洁净液中浸泡20‑30min后刷洗表面，之后用水冲洗1‑2 h，然后在无菌环境中先用75%的酒精灭菌处理幼嫩果实30‑60s，之后用每100ml含3‑4滴吐温40的0.1％ HgCl2溶液对其灭菌15min，再用无菌水清洗4‑6次，每次1‑3min，最后取出幼嫩种子，挤出幼嫩种胚，使用无菌水漂洗所述幼嫩种胚后获得外植体；所述愈伤组织的诱导中，将所述外植体置于愈伤组织诱导培养基进行诱导30天后得到愈伤组织，所述愈伤组织诱导培养基添加：MS、0.1‑2.0 mg/L的6‑糠基氨基嘌呤和0.5‑4.0 mg/L的2，4‑二氯苯氧乙酸；所述不定芽分化诱导中，将愈伤组织诱导培养得到的愈伤组织置于分化培养基上诱导30天后产生不定芽，所述分化培养基添加：MS、0.1‑2.0 mg/L 的6‑苄基嘌呤(6‑BA)和0.01‑0.5 mg/L的α‑萘乙酸；所述不定芽增殖培养中，将不定芽分化诱导中得到的不定芽置于增殖培养基中诱导不定芽增殖15‑30天，该增殖培养基添加：1/2MS、2.0‑3.0 mg/L的6‑苄基嘌呤和0.2‑1.0 mg/L的α‑萘乙酸；所述生根诱导培养中，将不定芽增殖培养中产生的不定芽置于生根诱导培养基上诱导生根，得到猫儿屎再生植株，所述生根诱导培养基添加：1/2MS和0.3‑0.9 mg/L吲哚丁酸或1/2MS和0.3‑0.9 mg/L 的α‑萘乙酸。