[发明专利]一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法

摘要

一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法，是在培养容器内分层放置下层基质、中层基质、隔离网与上层基质，再将无菌的宿主植物植株种植于上层基质内；将该培养容器放置于容器托盘内，培养容器底部设有排吸水口；在植株种植层浇灌低磷营养液,在容器托盘内浇灌高磷营养液,由于将培养容器分为三层且中层作为缓冲层,植株种植层浇灌低磷营养液保持植株基本的生长需求,下层基质虹吸高磷营养液以维持下层高磷环境,同时中层的大颗粒阻断最下层到植株种植层的虹吸作用,丛枝菌根真菌为了帮助宿主吸收磷势必进入下层,在宿主植物将死时在下层大量产孢,从而在最下层获得大量的丛枝菌根真菌孢子,用来单孢扩繁和鉴定。

主权项

1.一种分层培养富集丛枝菌根真菌孢子的方法，其特征在于所采用的技术方案是：a.首先用粒径为2mm的下层基质(6)填充至培养容器的三分之一至二分之一处,然后再填放1cm厚粒径为4mm的中层基质(5)；b.再将带有框架的孔径为45um的隔离网(4)放置中层基质上(5),其框架的四周与培养容器(1)内壁贴合紧实,以使上层根系无法从框架和培养容器(1)的贴合处通过；c.将采集的新鲜野外宿主根际土与粒径为2mm的基质混合作为上层基质(3)填充在隔离网(4)上面,再将无菌的宿主植物植株种植于上层基质(3)内；d.将该培养容器(1)放置于容器托盘(2)内，培养容器(1)底部设有排吸水口(7)；e.在植株种植层对植物浇灌P浓度调为1/100的Hoagland营养液,每30日浇灌一次,平时浇灌蒸馏水保持植株种植层湿润；同时在容器托盘(2)内每15日浇灌P浓度调为2倍的Hoagland营养液,这样容器托盘(2)中的营养液可以通过排吸水口(7)吸入下层基质(5),以便让培养容器内的下层基质保持高的磷浓度；f.丛枝菌根真菌的生活史为90日,经过120日的培养后让宿主植株自然干死,然后将植株种植层去掉,利用湿筛倾析法来获得下层基质与中层基质中的带有连孢菌丝的丛枝菌根真菌孢子。