[发明专利]一种多点突变单管快速检测方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201610532349.9 | 申请日： | 2014-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN106148521B | 公开（公告）日： | 2019-11-15 |
| 发明（设计）人： | 陈嘉昌;陈华云;肖湘文;丁渭;刘淑园;张天海;黄爽 | 申请（专利权）人： | 广州和实生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 44205 广州嘉权专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 许飞<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 510665广东省广州市经*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种多点突变单管快速检测方法及试剂盒。多点突变单管快速检测方法，包括：1）设计ARMS引物及对应的下游引物、中介连接引物、通用荧光探针及其淬灭探针；2）将ARMS引物及对应的下游引物、中介连接引物、通用荧光探针及其淬灭探针与热启动快速Taq酶系统混合，扩增；3）检测反应体系的荧光变化，确定是否存在点突变。本发明的发明，操作简单，可以定性检测出多点突变的存在。本发明的检测方法中使用的引物设计难度低，大幅降低了引物合成的成本；克服了现有ARMS技术的局限性，大大提高了其检测通量；实现了1管反应取代了之前的多管检测，节省人力物力。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 多点 突变 快速 检测 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.多点突变单管快速检测方法，包括如下步骤：/n1)设计针对不同点突变的ARMS引物及对应的下游引物、中介连接引物、通用荧光探针及其淬灭探针；其中，中介连接引物由通用序列部分和特异序列部分构成，通用序列部分与通用荧光探针部分序列互补，特异序列部分与点突变下游的部分序列互补；/n2)将ARMS引物及对应的下游引物、中介连接引物、通用荧光探针及其淬灭探针与热启动快速Taq酶系统混合，扩增；/n3)检测反应体系的荧光变化，确定是否存在点突变；/n所述方法不用于疾病的诊断；/n通用荧光探针上连接荧光基团的核苷酸和淬灭探针上连接淬灭基团的核苷酸在互补配对后的间距不超过4个核苷酸；/n中介连接引物中与突变位点下游的部分序列互补的核酸数量为15～30bp；/n中介连接引物中与通用荧光探针部分核酸互补配对的核酸数量为15～45bp；/n通用荧光探针的一端连接有保护核酸序列。/n
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