[发明专利]一种细菌纤维素膜组织工程化人工肌腱支架的制备方法

摘要

本发明涉及一种细菌纤维素膜（BC膜）组织工程化人工肌腱支架的制备方法。技术方案如下：将木糖葡糖醋杆菌菌种接种到固体培养基活化后，在摇床的条件下培养24～32h制成木糖葡糖醋杆菌种子液。木糖葡糖醋杆菌种子液接入6‑8%体积的接种量接入到酒糟降解液复合液中，28℃静置培养4～6得到细菌纤维素膜。取细菌纤维素膜，冲洗后将细菌纤维素膜用蒸馏水浸24～28h，得到白色半透明的细菌纤维素膜。本发明的有益效果是以细菌纤维素膜（BC膜）作为支架材料，与传统的高分子材料相比，孔隙率、持水性、复水性、力学性能符合要求，而且具有天然、细胞相容性好等特点，符合组织工程化人工肌腱支架的要求。

主权项

1.一种细菌纤维素膜组织工程化人工肌腱支架的制备方法，其特征是：1）将木糖葡糖醋杆菌（Glucoacetobacter xylinus）菌种接种到固体培养基进行常规的活化后，从固体培养基上挑选活化的菌种，接入装有100ml液体培养基的500ml锥形瓶，在28℃和160r/min摇床的条件下培养24～32h制成木糖葡糖醋杆菌种子液，备用；2）木糖葡糖醋杆菌种子液以每升酒糟降解液复合液接入6～8%体积的接种量，接入到酒糟降解液复合液中，充分震荡，使菌液均匀后，放置于28℃培养箱中进行静置培养；培养4～6天后，可见液体培养基液面浮有细菌纤维素膜，此时细菌纤维素膜厚度为2.5～4.5 mm ；3）取出浮于培养基表面的细菌纤维素膜，用自来水多次冲洗后，放于0.1M的NaOH溶液中加热并煮沸10min，去除膜中的培养基和菌体等杂质，取出，加蒸馏水漂洗10 min；再将细菌纤维素膜放于0.1M的NaOH溶液并再次煮沸10min，用蒸馏水多次漂洗细菌纤维素膜，直至洗涤水pH值为7.0为止；4）将细菌纤维素膜用蒸馏水浸24～28h，得到白色半透明的细菌纤维素膜；5）采用基本符合天然肌腱形状和尺寸的不锈钢模具，将制备的BC膜，填充于模具内，压制定型得到所述的细菌纤维素膜组织工程化人工肌腱支架；所述的固体培养基，其制备配方为：葡萄糖3%，蛋白胨0.8%，酵母浸出物0.8%，柠檬酸0.1%，磷酸氢二钠0.6%，硫酸镁0.2%，琼脂粉2%，加水配制，灭菌备用；所述的液体培养基，其配方为：葡萄糖2%，蛋白胨0.5%，酵母浸出物0.5%，柠檬酸0.1%，磷酸氢二钠0.2%，硫酸镁0.1%；液体培养基pH 6.0‑6.5；所述的复合酶，各组分重量比为中温α‑淀粉酶：糖化酶：中性蛋白酶＝3：4：3。