[发明专利]一种可提高枯草菌脂肽钠产量的发酵培养方法

摘要

本发明涉及一种可提高枯草菌脂肽钠产量的发酵培养方法，其特征在于：(1)以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）为出发菌进行种子菌培养；(2)发酵培养：按体积分数2.5~12%的接种量将步骤(1)中培养好的种子菌接入发酵培养基，所述发酵培养基由葡萄糖、海藻油和米糠蜡作为碳源，D‑谷氨酸和D‑亮氨酸的总质量浓度为3~8g/L；(3)碱化成盐：得枯草菌脂肽钠粗品。本发明制备枯草菌脂肽钠产量高，所得枯草菌脂肽钠表面活性更强。

主权项

1.一种提高枯草菌脂肽钠产量的发酵培养方法，其特征在于采用以下步骤：(1) 种子菌培养：以保藏编号为CICC No. 23718的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）为出发菌株，将保存的菌种转接至LB平板上，将其置于37℃培养箱活化24h；用接种环从新鲜斜面挑取一环接种于种子液体培养基中，于28℃，210rpm下摇床培养24h后作为种子菌备用；所述种子液体培养基的配方为：牛肉浸膏4.0g/L，蛋白胨12.0g/L，酵母膏6.0g/L，NaCl 3.0g/L，葡萄糖8.0g/L；所述种子液体培养基的pH为 6.5~7.2；(2) 发酵培养：按体积分数2.5~12%的接种量将步骤(1)中培养好的种子菌接入发酵培养基，于32~40℃，100~320rpm下摇床培养24~60h，发酵过程中通入无菌空气，通气量为4~10m3/h，并加入0.5~2.0mol/L NaOH溶液，维持发酵液pH在6.5~7.2，发酵完成得全培养液；所述发酵培养基组成为：葡萄糖、海藻油和米糠蜡作为碳源，碳源的总质量浓度12~80g/L，所述碳源中的葡萄糖、海藻油、米糠蜡质量比为 10~15 : 1.5~3 : 0.5~1；D‑谷氨酸和D‑亮氨酸的总质量浓度为3~8g/L，其中D‑谷氨酸与D‑亮氨酸的质量比为 4~8 : 1；KH2PO4 的质量浓度为2~4g/L；NH4NO3的质量浓度为2~4g/L；Na2HPO4的质量浓度为3~5g/L；MgSO4·7H2O的质量浓度为0.05~0.25g/L；FeSO4·7H2O的质量浓度为0.12~0.46g/L；CaCl2·2H2O的质量浓度为0.01~0.08g/L；EDTA‑2Na的质量浓度为0.01~1.00g/L；(3) 碱化成盐：将步骤(2)中所得全培养液，在4℃、10000rpm下离心10min去除菌体，得上清液，用HCl溶液调节所述上清液pH至2~3；在4℃下放置24h，离心收集沉淀物，得到枯草菌脂肽粗产物；以枯草菌脂肽粗产物 : 纯净水=1:1000~1200的质量比，将枯草菌脂肽粗产物溶于纯净水中，然后用3~5 mol/L NaOH溶液调节pH至6.5~7.2，干燥后即得枯草菌脂肽钠粗品。