[发明专利]结合RT-PCR与NEST-PCR的草鱼出血病病毒检测试剂盒和检测方法有效
| 申请号： | 201610537898.5 | 申请日： | 2016-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN105925730B | 公开（公告）日： | 2019-09-17 |
| 发明（设计）人： | 叶星;董浚键;赵立祥;曾庆凯;孙成飞;田园园 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/6848 |
| 代理公司： | 广州弘邦专利商标事务所有限公司 44236 | 代理人： | 张钇斌 |
| 地址： | 510380 广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供一种结合RT‑PCR与NEST‑PCR的草鱼出血病病毒检测试剂盒和检测方法。设计巢式PCR反应(NEST‑PCR)，以RT‑PCR反应产物作为模板，进行NEST‑PCR扩增，有效提高了检测的灵敏度，可检测到携带较低病毒拷贝数的样品。 | ||
| 搜索关键词： | 结合 rt pcr nest 草鱼 出血病 病毒 检测 试剂盒 方法 | ||
【主权项】：
1.结合RT‑PCR与NEST‑PCR的草鱼出血病病毒检测试剂盒，其特征在于，包括：(1)一步法RT‑PCR反应混合液：25μL的反应体系中，包括One Step Enzyme Mix1μL，2×1 Step Buffer12.5μL，引物对1的浓度为0.4μM，所述引物对1具有SEQ ID NO：1‑2所示的核苷酸序列，具体地，引物对1的序列如下：正向引物：CCCTAATCCTCGCATACTCCACAAC(SEQ ID NO：1)反向引物：TCTTTCACAAATAACCCGTCTCCCG(SEQ ID NO：2)(2)NEST‑PCR反应混合液：20μL的反应体系中，包括Premix Taq Mix10μL，引物对2的浓度为0.4μM，所述引物对2具有SEQ ID NO：3‑4所示的核苷酸序列，具体地，引物对2的序列如下：正向引物：TGACAGTGCGATTGACAGAGTT(SEQ ID NO：3)反向引物：ATATATGTATAGTGGCGCGTCC(SEQ ID NO：4)
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