[发明专利]特异性表达人CD46转基因猪的实时荧光LAMP检测方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201610540114.4 | 申请日： | 2016-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN106191242B | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 李刚;刘巍;潘登科;梁琳 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 11002 北京路浩知识产权代理有限公司 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种特异性表达人CD46转基因猪的实时荧光LAMP检测方法及试剂盒，通过筛选6条特异性引物对特异性表达人CD46转基因猪进行实时荧光LAMP检测，并优化了检测体系和反应条件。所述方法适用于现场快速筛查，闭管检测荧光扩增信号，避免了反应后的开盖操作，降低了气溶胶污染的风险，大大减少了发生假阳性的可能。同时，缩短了反应时间，45min内可以得出判定结果。 | ||
| 搜索关键词： | 特异性 表达 cd46 转基因 实时 荧光 lamp 检测 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种特异性表达人CD46转基因猪的实时荧光LAMP检测方法，其特征在于，所述方法基于便携式实时荧光检测仪，具体包括以下步骤：/n1）提取待检样品基因组DNA作为LAMP检测反应的模板；/n2）配制反应液，构建检测体系；所述检测体系为25μL荧光改良LAMP反应体系，包括：两条内引物各1.6μM，两条外引物各0.2μM，两条环引物0.8μM，1μLDNA模板；/n所述的反应液包括：/n步骤1）提取的DNA模板；/n两条外引物：F3：GCTGTGTCCGTGGTGAGA；/nB3：GAACTCTGCACACAGGCC；/n两条内引物：FIP：ACCCTTACCGCGGGTACTGTCTTTGCCCT/nGTGTTCCCTTG；/nBIP：GTCTGCTGTGCCCCATGTGCTTACGCACAGCACGCTC；/n两条环引物：LF：CCCTAATGAACACCCCACTCA；/nLB：CCTGGCCAGGTGTTGCT；/n3）等温扩增反应：将所述反应液离心混匀，进行等温扩增反应；/n4）结果判断：若有“S”型扩增曲线，则判断为阳性，即具有hCD46基因；若无“S”型扩增曲线，则判为阴性，即不含有hCD46基因。/n
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