[发明专利]一种促红细胞生长素在重症颈椎病颈髓损伤中的探究与应用

摘要

本发明公开了一种促红细胞生长素在重症颈椎病颈髓损伤中的探究与应用，包括促红细胞生长素细胞试验研究、动物实验和临床应用研究，该促红细胞生长素的研究材料、方法与步骤如下所述：S1、研究EPO对体外培养的骨髓间充质干细胞的干预作用，S2、研究EPO与骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性脊髓损伤，S3、研究EPO治疗临床中颈髓损伤。本发明通过细胞、动物、临床三个层面的研究，深刻了解到促红细胞生成素能够对脊髓损伤的治疗效果显著，能够单独或与骨髓间充质干细胞、甲强龙等协同治疗，从而有效治疗重症脊髓损伤型颈椎病。

主权项

一种促红细胞生长素在重症颈椎病颈髓损伤中的探究与应用，其特征在于：包括促红细胞生长素细胞试验研究、动物实验和临床应用研究，该促红细胞生长素的研究材料、方法与步骤如下所述：S1、研究促红细胞生长素(EPO)对体外培养的骨髓间充质干细胞的干预作用：1)选择实验大鼠，分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞，2)取第3代骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs)，无血清条件下，根据使用EPO的不同浓度(0.50、1.00、2.00、4.00、10.00U/mL)分组，与骨髓间充质干细胞共同培养为实验组，不加EPO的骨髓间充质干细胞为空白对照，在96h后行MTT检测，观察骨髓间充质干细胞的增殖情况，计算细胞增殖指数，并进行比较，3)取第3代骨髓间充质干细胞，促红细胞生长素10U/mL与骨髓间充质干细胞共同培养，于96h后用流式细胞仪分析细胞增殖周期；S2、研究促红细胞生长素(EPO)与骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性脊髓损伤：s2‑1、研究促红细胞生长素(EPO)动员骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性脊髓损伤：1)将30只SD大鼠随机分成假手术组、生理盐水组及EPO治疗组，各组均经尾静脉注射Hoechst3342标记的BMSCs，2)移植后1、3、7、14、21、28d采用BBB法进行大鼠后肢运动功能评分观察大鼠神经功能恢复情况，应用免疫荧光检测比较各组BMSCs动员到脊髓损伤处的数目，Westernblot检测损伤局部BMSCs表达脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)的水平；s2‑2、研究促红细胞生长素(EPO)联合骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性脊髓损伤：1)将75只SD大鼠随机分成脊髓损伤组、EPO治疗组、BMSCs治疗组、EPO+BMSCs治疗组和假手术组，共5组，每组15只，采用改良Allen法制成大鼠急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)模型，2)EPO治疗是在脊髓损伤前24h腹腔注射重组人促红细胞生成素(rhEPO)5000U/kg，BMSCs治疗是将纯化的BMSCs在脊髓损伤时经尾静脉注射,术后第1、3、7、14、21、28天采用BBB法进行大鼠后肢运动功能评分，观察大鼠神经功能恢复情况，术后第1、28天HE染色观察脊髓形态学变化，3)、Western blot检测第14天损伤局部脑源性神经营养因子(brainderived neurotrophic factor,BDNF)的表达水平；S3、研究促红细胞生成素(EPO)治疗临床中颈髓损伤：s3‑1、研究促红细胞生成素(EPO)联合甲强龙治疗脊髓损伤的临床应用：1)回顾性分析我科既往收治的脊髓损伤患者55病例，随机分为EPO联合甲强龙组和甲强龙组。治疗前、治疗后1周及1年按美国脊髓损伤学会(ASIA)标准行神经功能评分，统计神经功能改善率，并行日常生活活动(activity of daily living，ADL)评分比较。s3‑2、研究促红细胞生成素(EPO)在颈髓损伤围手术期的应用：1)回顾性分析既往在我科行手术治疗的重症脊髓型颈椎病颈髓损伤病例43例，随机分为两组，其中22例A组围手术期使用EPO，21例B组不使用EPO的，记录术前、术后一周、术后一年按日本骨科协会(JOA)评分计算患者的神经功能恢复率，统计并发症。使用ODOM标准评估远期神经功能变化。