[发明专利]一种黑草总黄酮的提取与测定方法

摘要

本发明公开了了一种黑草中总黄酮的提取和测定方法，用D101大孔树脂装柱，乙醇洗脱提取黑草总黄酮；以芦丁作为对照品，加入亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠测定吸光度，依次确定总黄酮含量，通过高效液相色谱法测定出黑草总黄酮中木犀草素、芹菜素及香叶木素的含量，流动相为乙腈‑0.1%磷酸，安捷伦ZORBAX Eclipse XDB‑C18为色谱柱，检测波长350nm。黑草总黄酮具有抗凝、抗炎、镇静和抗过敏作用，且毒性小，本发明为黑草总黄酮的药用价值开发提供了参考数据。

主权项

1.一种黑草总黄酮的提取方法，其特征在于，步骤如下：（1）D101大孔树脂的预处理：以体积浓度95%乙醇浸泡D101大孔树脂20‑30h，充分溶胀后，除去上浮树脂及杂物，用湿法装柱，继续用95%乙醇不断洗涤，洗至流出液与水混合无白色浑浊现象，改用水洗至无醇味，备用；所述流出液与水混合的体积比为1：3；（2）药材的提取、浓缩：取黑草药材，粉碎成粗粉，加入10倍于黑草重量的体积浓度60%乙醇；加热回流提取5次，每次2小时，提取液滤过，合并滤液；滤液回收乙醇，并浓缩至无醇味；（3）将步骤（2）中的浓缩液上至（1）柱中，用体积浓度5%‑95%乙醇洗至颜色较浅，收集并浓缩至干，即得黑草总黄酮；所述的黑草总黄酮中含有木犀草素、芹菜素和香叶木素；所述的黑草总黄酮含量以芦丁计算重量含量不少于50.0%；所述的黑草总黄酮中木犀草素、芹菜素及香叶木素含量的测定方法，采用高效液相色谱法，测定过程包括以下步骤：（1）色谱条件为：色谱柱：安捷伦ZORBAX Eclipse XDB‑C18：4.6×250mm，5µm色谱柱；流动相：乙腈‑0.1%磷酸；流速为1mL/min；检测波长为350nm，进样量为10µL；所述流动相的体积比为25:75；（2）步骤：（A）对照品溶液的制备：分别精密称取木犀草素对照品14.53mg、芹菜素对照品4.32mg以及香叶木素对照品4.25mg，置于同一50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得木犀草素浓度为290.6µg/mL、芹菜素浓度为86.4µg/mL及香叶木素浓度为85µg/mL的对照品储备液；取对照品储备液2mL，置25mL容量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，得木犀草素浓度为23.25µg/mL、芹菜素浓度为6.91µg/mL及香叶木素浓度为6.8µg/mL的对照品溶液；（B）供试品溶液的制备：精密称取样品10mg，置25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀、滤过即得；（C）样品的测定：对对照品溶液及供试品溶液进行高效液相色谱分析，记录峰面积，并基于所得到的液相色谱分析结果，采用外标法计算所述黑草总黄酮中木犀草素、芹菜素及香叶木素的含量；黑草总黄酮中木犀草素含量不少于重量含量5%、芹菜素含量不少于重量含量1.5%、香叶木素含量不少于重量含量0.5%。