[发明专利]一种生姜的液体浅层快繁方法

摘要

本发明公开了一种生姜的液体浅层快繁方法，包括以下步骤1）材料热处理；2）外植体消毒与接种；3）初代培养；4）继代培养；5）生根培养；6）炼苗；7）移栽。本发明以生姜芽作为外植体进行培养，采用茎尖‑热处理脱毒技术，获得脱毒脱菌生姜种苗，与传统的只使用乙醇、HgCl2等消毒剂对外植体消毒方式相比，脱毒率高，成活率高。采用液体培养基进行浅层培养，优选培养条件，大大节约成本，为生姜良种的组织培养快繁体系提供技术参考。

主权项

一种生姜的液体浅层快繁方法，其特征在于包括以下步骤：1）材料热处理：精选块大、肉厚、色泽黄亮、芽眼饱满、未腐烂的健壮姜块，在自来水下洗净泥土，用50%多菌灵500倍液浸泡30 min消毒，然后用高温灭菌后的细沙覆盖，置于恒温培养箱内催芽，培养条件为温度36‑38℃，空气湿度为70‑80%，整个过程不需要光照，姜芽长出后，取培养箱中催芽的姜，50℃超高温处理5 min用于接种；2）外植体消毒与接种：切取经热处理后1‑2 cm的姜芽，自来水冲洗30 min，然后置于70%的乙醇中浸泡30 s，弃去乙醇，无菌水冲洗1次，再用10 % NaClO消毒10‑15 min，弃去NaClO溶液，无菌水冲洗5次，沥干水后，取出在超净工作台上利用双目解剖镜剥取0.2‑0.4 mm的茎尖分生组织；3）初代培养：将茎尖分生组织接种到初代培养基内进行培养，所述的初代培养基为：MS 培养基+2‑3 mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤+0.1‑0.3 mg/L的萘乙酸+7 g/L的琼脂+30 g/L的食用白糖，pH值范围为5.5‑5.8；4）继代培养：选择初代培养后苗高在3 cm以上，且具有3‑6个腋芽的外植体，接种于继代培养基中培养，待外植体产生丛生芽后，从每个丛芽上选择1株，用灭菌的剪刀，剪取芽基部0.5 cm以上的植物材料，用酶联免疫吸附法进行黄瓜花叶病毒和烟草花叶病毒检测；然后用消毒后的解剖刀从无毒姜丛生芽切取带两个或两个以上的芽，连带基部切掉所有的根及0.5 cm以上部分的茎段，转接至初代培养基中使腋芽伸长，苗高4 cm以上后再转接至液体继代培养基中继续增殖，所述的继代培养基为：MS培养基+10‑30g/L的食用白糖+2‑5 mg/ L的6‑苄氨基腺嘌呤+0.1‑0.5 mg/L的萘乙酸+0.1‑1.7 g/L的抗氧化剂，pH值范围为5.5‑ 5.8；所述抗氧化剂为0.5 g/L的硫代硫酸钠+0.1 g/L的硫脲+0.5 g/L的二硫苏糖醇+0.5 g/L的半胱氨酸+0.1 g/L的抗坏血酸；5）生根培养：选择苗高3 cm以上，具有3‑6个腋芽的外植体，接种于液体生根培养基中培养，所述生根培养基为：MS培养基+5‑20 mg/L的食用白糖+0.1‑0.4 mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤+0.2‑0.6 mg/L的萘乙酸+0.4‑2.0 mg/L的多效唑+100 g/L的土豆汁，pH值范围为5.5‑ 5.8；6）炼苗：将组培苗从培养室取出，放置于炼苗室中，温度保持在22‑29 ℃，湿度保持在70‑75 %，避免阳光直射；放置3‑4 d后，打开瓶盖，让幼苗逐渐适应外部环境，早晚用喷雾器对幼苗和室内进行喷雾湿度环境， 经过约1周的炼苗过程，即可移栽；7）移栽：把重量比为蛭石:珍珠岩=1:1的基质放到经过消毒的营养袋中，每个处理100 袋。