[发明专利]一种半枫荷种子萌发途径的组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种半枫荷种子萌发途径的组培快繁方法，包括以下步骤步骤1、无菌材料的建立；步骤2、种子萌发培养；步骤3、诱导愈伤组织；步骤4、愈伤组织增殖；步骤5、愈伤组织分化；步骤6、丛生芽诱导；步骤7、将步骤6得到的分化的丛生芽剪去基部后，接种于培养基中，得到壮苗；步骤8将步骤7得到的壮苗剪去基部后，接种于培养基中，进行生根培养。本发明的目的是提供一种快速的、增值率高、成活率高的半枫荷的完整的组织培养方法。

主权项

一种半枫荷种子萌发途径的组培快繁方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1、无菌材料的建立：取半枫荷蒴果晾晒后取种子进行无菌处理；步骤2、种子萌发培养：将步骤1处理后的种子消毒后接种于培养基中培养，得到萌发的种子；所述的培养基包括以下组分：改良MS培养基、GA30.2～0.8mg/L、VB21.0～5.0mg/L、白糖30g/L、琼脂3.6g/L；培养温度为25～27℃，光照强度为1500～2000lx、光照时间为10小时/天；步骤3、诱导愈伤组织：将步骤2处理后的萌发的种子的下胚轴作为诱导材料，剪切成茎段后，接种于培养基中，培养得到愈伤组织；所述的培养基包括以下组分：改良MS培养基、6‑BA0.5mg/L、2,4‑D0.2～0.5mg/L、VB21.0～6.0mg/L、白糖30g/L、琼脂3.6g/L；培养温度为25～27℃，光照强度为1500～2000lx、光照时间为10小时/天；步骤4、愈伤组织增殖：将步骤3得到的愈伤组织转接到培养基中，进行增殖培养；所述的培养基包括以下组分：改良MS培养基、6‑BA0.3～0.5mg/L、NAA0.05～0.4mg/L、VB21.0～3.0mg/L、白糖30g/L、琼脂3.6g/L；培养温度为25～27℃，光照强度为1500～2000lx、光照时间为10小时/天；步骤5、愈伤组织分化，将步骤4增殖后的愈伤组织切成块状物转入培养基培养，得到具有真叶的组织；所述的培养基包括以下组分：改良MS培养基、6‑BA0.5或0.8mg/L、NAA0.05～0.3mg/L、土白糖30g/L、琼脂3.6g/L；培养温度为24～28℃、光照强度为2000～3000lx、光照时间为10小时/天；步骤6、丛生芽诱导，将步骤5中的真叶剪下后接种到培养基中，得到分化的丛生芽；所述的培养基包括以下组分：改良MS培养基、6‑BA0.5～0.8mg/L、NAA0.1～0.3mg/L、VB21.0～5.0mg/L、白糖30g/L、琼脂3.6g/L；光照强度为1500～2000lx，每天光照培养12小时；步骤7、将步骤6得到的分化的丛生芽剪去基部后，接种于培养基中，得到壮苗；所述的培养基包括以下组分：改良MS培养基、NAA1.0～2.0mg/L、6‑BA0.1～1.0mg/L、VB22.0mg/L、GA31.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂3.6g/L；光照强度为2000～3000lx，每天光照培养12小时步骤8：将步骤7得到的壮苗剪去基部后，接种于培养基中，进行生根培养；所述的培养基包括以下组分：1/2改良MS培养基、NAA1.0mg/L、IBA1.0mg/L、GA32.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂3.6g/L；光照强度为2000～3000lx，光照培养12小时；所述的改良MS培养基中包含：NH4NO3340mg/L；KNO31318mg/L；MgSO4·7H2O370mg/L；KH2PO4170mg/L；CaCl2·2H2O440mg/L；MnSO4·4H2O22.3mg/L；ZnSO4·7H2O8.6mg/L；H3BO36.2mg/L；KI0.83mg/L；Na2MoO4·2H2O0.25mg/L；CuSO4·5H2O0.025mg/L；CoCl2·6H2O0.025mg/L；FeSO4·7H2O27.8mg/L；Na2‑EDTA·2H2O37.3mg/L；甘氨酸2.0mg/L；盐酸硫胺素0.1mg/L；盐酸吡哆醇0.5mg/L；IVB烟酸0.5mg/L；肌醇100mg/L；所述的1/2改良MS培养基中包含：NH4NO3170mg/L；KNO3659mg/L；MgSO4·7H2O185mg/L；KH2PO485mg/L；CaCl2·2H2O220mg/L；MnSO4·4H2O22.3mg/L；ZnSO4·7H2O8.6mg/L；H3BO36.2mg/L；KI0.83mg/L；Na2MoO4·2H2O0.25mg/L；CuSO4·5H2O0.025mg/L；CoCl2·6H2O0.025mg/L；FeSO4·7H2O27.8mg/L；Na2‑EDTA·2H2O37.3mg/L；甘氨酸2.0mg/L；盐酸硫胺素0.1mg/L；盐酸吡哆醇0.5mg/L；IVB烟酸0.5mg/L；肌醇100mg/L。