[发明专利]菜豆荚斑驳病毒ELISA-巢式RT-PCR检测试剂盒及其检测方法在审
| 申请号： | 201610550115.7 | 申请日： | 2016-07-13 |
| 公开（公告）号： | CN106011312A | 公开（公告）日： | 2016-10-12 |
| 发明（设计）人： | 沈建国;廖富荣;蔡伟;高芳銮 | 申请（专利权）人： | 福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 福州君诚知识产权代理有限公司 35211 | 代理人： | 戴雨君 |
| 地址： | 350001 福建省福州*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种菜豆荚斑驳病毒ELISA‑巢式RT‑PCR检测试剂盒及其检测方法。所述试剂盒包括：PBST缓冲液、包被缓冲液、BPMV抗体、酶标抗体缓冲液、BPMV酶标抗体、pNPP、外侧正向引物、反向引物、内侧正向引物、RT Buffer、RNA酶抑制因子、反转录酶、dNTPs、Taq PCR Mix、阳性对照、阴性对照和RNase‑free ddH2O。本发明将ELISA和巢式RT‑PCR相结合，首先对样品提取液进行ELISA检测，再在酶标板孔中直接反转录合成cDNA，利用cDNA为模板进行第一轮PCR，然后再以第一轮PCR产物为模板进行第二轮PCR，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，如果出现大小为296 bp的特异性目的片段，则判定检测的病毒为菜豆荚斑驳病毒。本发明特异性强、准确性好、灵敏度高、操作简便，适用于进出境及农业生产上菜豆荚斑驳病毒的快速检测鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 菜豆 斑驳 病毒 elisa 巢式 rt pcr 检测 试剂盒 及其 方法 | ||
【主权项】：
菜豆荚斑驳病毒ELISA‑巢式RT‑PCR检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：1）PBST缓冲液：1×；2）包被缓冲液：1×；3）BPMV抗体；4）酶标抗体缓冲液：1×；5）BPMV酶标抗体；6）pNPP；7）外侧正向引物：10μmol/L，引物序列为5’‑GGCCTGTGCTATGAATAGT‑3’；8）反向引物：10μmol/L，引物序列为5’‑CCCATCCACCTATTTAACAC‑3’；9）内侧正向引物：10μmol/L，引物序列为5’‑GCCAGTTCTGATATTTACACC‑3’；10）RT Buffer：5×；11）RNA酶抑制因子：40U/μL；12）反转录酶：200U/μL；13）dNTPs：10mmol/L；14）Taq PCR Mix：2×；15）菜豆荚斑驳病毒的阳性对照样品；16）不含菜豆荚斑驳病毒的阴性对照样品；17）RNase‑free ddH2O。
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