[发明专利]一种灵敏检测小肽MUC1的方法有效
申请号: | 201610551557.3 | 申请日: | 2016-07-14 |
公开(公告)号: | CN106248941B | 公开(公告)日: | 2019-03-05 |
发明(设计)人: | 马超;于京华;刘海云;颜梅;葛慎光;李丽;王秀;杨春蕾;张彦 | 申请(专利权)人: | 济南大学 |
主分类号: | G01N33/574 | 分类号: | G01N33/574;G01N27/327 |
代理公司: | 济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240 | 代理人: | 李茜 |
地址: | 250022 山东*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本专利公开了一种灵敏检测肿瘤相关小肽MUC1的方法,涉及电化学发光检测技术领域。利用适配体与目标小肽特异性识别的特点,设计特殊的适配体/引发序列,从而达到目标物特异性识别以及检测目标物转化的目的;通过结合两种发卡结构探针的杂交反应完成信号放大的策略,实现信号的有效放大;最终通过引入电化学探针,采用电化学发光的方法实现MUC1的灵敏检测。本方法检测成本低、灵敏度高。 | ||
搜索关键词: | 一种 灵敏 检测 muc1 方法 | ||
【主权项】:
1.一种适配体/引发序列在制备小肽MUC1检测试剂中的应用,其特征是包括以下步骤:(1)探针预变性巯基修饰的捕获探针、发卡探针1、发卡探针2以及适配体/引发序列,适配体的英文名称为aptamer,在95 ºC下分别孵育0.5 h;将这四种溶液在25 ºC下放置1 h;其中,适配体/引发序列是由序列为5’‑GCA GTT GAT CCT TTG GAT ACC CTG G‑3’和5’‑AGG CCT AAA CCT TCT CCA GGG TAT CAA CTG C‑3’两条DNA链复合而成;捕获探针序列为5’‑TTT AGG CCT TTT‑3’;发卡探针1序列为5’‑CCA GGG TAT CAA CTG CCA AAG TGC AGT TGA TAC CCT GGA GAA GG‑3’;发卡探针2序列为5’‑ACT TTG GCA GTT GAT ACC CTG GCC TTC TCC AGG GTA TCA ACT GC‑3’;(2)检测溶液的制备该步骤中的总反应混合液体积为200 µL,不同浓度的小肽MUC1与一定浓度的适配体/引发序列在工作缓冲溶液中反应,所得混合溶液即为检测溶液;工作缓冲溶液的成分为20 mM Tris盐酸, 100 mM 氯化钠, 10 mM 氯化钾, 10 mM 氯化镁,pH 为7.5;(3)电极修饰过程该步骤每一步修饰完成后都使用浓度为0.01 M、pH 7.4的磷酸缓冲溶液清洗,孵育温度均为25 ºC;首先,将10 µL 浓度为2 µM的捕获探针滴加到预处理过的金电极上,孵育过夜;滴加5 µL 浓度为1 mM的巯基己醇,孵育2 h;滴加10 µL 步骤(2)中所得检测溶液,孵育1 h;依次滴加5 µL 浓度均为1 µM的发卡探针1和发卡探针2,孵育6 h;滴加10 µL 浓度为2 mM的三联吡啶钌溶液;(4)电化学发光检测电化学发光检测的实验参数如下:扫描电压范围为‑0.1 ~ 0.6 V、扫描速度为50 mV S−1、光电倍增管设置为600 V。
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