[发明专利]两步乳液PCR的检测方法有效
| 申请号： | 201610553133.0 | 申请日： | 2016-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN106148569B | 公开（公告）日： | 2020-01-24 |
| 发明（设计）人： | 邵可可;闫美娜;邵启祥 | 申请（专利权）人： | 江苏大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 212013 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了两步乳液PCR的检测方法，属于生物医学与临床医学技术领域。本发明所述方法具体为首先制备油包水乳液，然后将装有油包水乳液的PCR反应管，置入PCR仪中进行第一步扩增；再将扩增产物离心弃上层油相后制备水包油乳液，分装入PCR反应管进行第二步扩增，扩增结束后进行琼脂糖凝胶电泳检测；本发明进一步提高了产量，提高基因检测的灵敏度；不仅具备乳液PCR抗干扰、特异性高的特点，还具备乳液PCR结合常规PCR法高产量的特点，同时还没有应用乙醚破乳化、提纯等过程，不经简单方便，还更经济。 | ||
| 搜索关键词： | 乳液 pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.两步乳液PCR检测方法，其特征在于按照下述步骤进行：/n（1）油包水乳液颗粒的制备：/n水相为PCR反应液，油相组成为在矿物油中加入占总体积为4.5% (v/v) 司盘80、占总体积为0.4% (v/v) 吐温80、占总体积为0.05% (v/v) 聚乙二醇辛基苯基醚，其余为矿物油，3000 rpm漩涡震荡5 min；油包水乳液颗粒的制作：把0.1 mL含模板的PCR反应液，以每滴8~10 μL的速度匀速滴入含0.2 mL油相的2 mL平底冷冻管中，滴入时间控制在1 min左右，同时用搅拌子为8×1.5 mm的磁力搅拌器以1300 rpm的速度搅拌，当水相加完后继续搅拌5 min，得到0.3 mL的油包水乳液，分装入PCR反应管中；/n（2）第一步PCR扩增：/n把步骤（1）中的分装的装有油包水乳液的PCR反应管，置入PCR仪中进行扩增；/n（3）水包油乳液颗粒的制备：/n把步骤（2）中的扩增产物14000g/min，0℃，离心10min，弃上层油相，加入适量步骤（1）中不含模板的PCR反应液，3000 rpm漩涡震荡，当油相充分散开，2000 rpm继续震荡2 min，1000 rpm离心20 s，制成水包油乳化液；/n（4）第二步PCR扩增：/n把步骤（3）中的水包油乳化液的PCR反应管，置入PCR仪中进行扩增；/n（5）2%琼脂糖电泳检测：/n60V，40min电泳，凝胶成像仪拍照记录；/n所述方法为非诊断方法。/n
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