[发明专利]一种用于检测癌细胞中H2S的三维纸分析器件的制备方法

摘要

本发明公开了一种用于检测癌细胞中H₂S的三维纸分析器件的制备方法。在计算机上利用Adobe illustrator CS4软件设计微流控纸芯片的疏水蜡打印图案；利用蜡打印机打印纸芯片，通过丝网印刷技术在辅助区域印刷Ag/AgCl参比电极和碳对电极；在工作区域生长三维金钯‑石墨烯网络，进而修饰辣根过氧化物酶、适配体以及捕获癌细胞；制作电路板，并将修饰过的纸芯片与电路板组装；滴加检测溶液，利用循环伏安法进行电化学信号检测，通过抑制率%与癌细胞浓度的关系实现对癌细胞中H₂S的检测。

主权项

1.一种用于检测癌细胞中H2S的三维纸分析器件的制备方法，其特征是包括以下步骤：（1）在计算机上利用Adobe illustrator CS4软件设计微流控纸芯片的疏水蜡打印图案；（2）将步骤（1）中设计的打印图案通过蜡打印机打印在色谱纸上，然后将打印过的色谱纸放在烘箱中，在100‑150 ℃加热30‑80秒使蜡融化并渗透整个色谱纸的厚度，形成疏水墙；（3）在计算机上设计与蜡打印图案相匹配的对电极和参比电极的印刷图案；（4）将步骤（2）中得到的蜡打印色谱纸通过丝网印刷技术按照步（3）设计的印刷电极图案印刷碳对电极和Ag/AgCl参比电极；（5）将步骤（4）中得到的色谱纸的样品板和辅助板沿中间线剪开，在样品板的工作区域，生长三维网络状的金钯‑还原氧化石墨烯，制备三维网络状的金钯‑还原氧化石墨烯纸工作电极；（6）在步骤（5）中所得到三维网络状的金钯‑还原氧化石墨烯纸工作电极的工作区域，修饰辣根过氧化物酶（HRP），3′端带有氨基的适配体链，随后采用牛血清白蛋白封闭非特异性结合位点，最后通过3′端带有氨基的适配体链捕获癌细胞；（7）在计算机上利用Adobe illustrator CS4软件设计电路板A和电路板B的尺寸和形状，然后根据设计的尺寸和形状完成电路板A和电路板B的制作；所设计的电路板A和电路板B均为长方形，长和宽分别为27 mm和20 mm，其中用于连接纸工作区域的导电片a，其形状为直径为8 mm的圆，用于连接到电化学工作站的导电片b，其形状为边长为5 mm的正方形，用于连接电化学工作站和参比电极的导电片c，其形状为长为10 mm，宽为5 mm的长方形，用于连接对电极的导电片d，其形状为边长为5 mm的正方形，用于连接两个电路板的通孔e，其形状为直径为8 mm的圆；（8）将步骤（5）中得到的辅助板完全叠放在步骤（6）中得到的样品板上，然后将完全叠合的芯片与步骤（7）中得到的电路板A和电路板B进行组装；（9）借助步骤（7）中电路板A和电路板B上的导电片将步骤（8）中组装完成的纸分析器件连接到电化学工作站，在电路板B的通孔e中加入检测溶液，利用循环伏安法在扫描速度为100 mV/s，扫描电压范围为‑0.6 ~ 0.6V进行电化学信号检测，并通过计算抑制率，实现癌细胞中H2S的检测。