[发明专利]一种交联卤醇脱卤酶聚集体的制备方法

摘要

本发明公开了一种交联卤醇脱卤酶聚集体的制备方法，属于生物化工领域。本发明在冰浴条件下，向卤醇脱卤粗酶液中添加了牛血清白蛋白制剂作为保护剂，以硫酸铵溶液为沉淀剂，戊二醛作为交联剂制备交联卤醇脱卤酶聚集体；其中卤醇脱卤粗酶液通过构建重组菌进行原核体外诱导表达制备。本发明实验操作简单，成本低廉，制备出的交联卤醇脱卤酶聚集体具有较高的机械强度、较好的耐热性并可实现重复利用，经实验证实,最优制备条件下固定化酶量可达总酶量的80％以上，交联卤醇脱卤酶聚集体酶活力为470.2U/g，与游离粗酶的酶活相比，相对酶活力可达91.36％，可广泛应用于有机卤化物等环境污染物的降解及手性药物合成过程中的催化。

主权项

1.一种交联卤醇脱卤酶聚集体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A：制备卤醇脱卤粗酶液；A1：将重组卤醇脱卤酶基因转入宿主细胞E.coli MC1061中，得到重组菌E.coli MC1061；A2：将步骤A1制得的重组菌E.coli MC1061进行原核体外诱导表达，得到诱导菌，对诱导菌进行离心处理，获得菌体，然后加入磷酸盐缓冲液，并进行超声破碎，再进行离心处理，收集上清，制得卤醇脱卤酶表达量达到50％以上的粗酶液；B：聚集体的形成；冰浴条件下，在步骤A制得的粗酶液中加入牛血清白蛋白形成混合液，然后加入质量分数为50％～90％的饱和硫酸铵溶液对所述混合液进行沉淀分离，形成卤醇脱卤酶聚集体；其中，所述牛血清白蛋白与卤醇脱卤粗酶的质量比为1～20∶10，所述饱和硫酸铵溶液与所述混合液体积比为2.5～15∶1；C：聚集体的交联；在步骤B所得体系中加入戊二醛交联卤醇脱卤酶，交联反应完成后进行离心处理，离心所得沉淀经磷酸盐缓冲液反复冲洗至清洗液检测不出任何酶活力，制得交联卤醇脱卤酶聚集体。