[发明专利]一种风兰的组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种风兰的组织培养快速繁殖方法，选取风兰的叶片作为组培用的外植体；对叶片进行珠芽诱导培养形成类原球茎；类原球茎通过循环发生和重复发生进行有效增殖，并逐渐分化形成不定芽；不定芽生根培养形成不定根后进行驯化移栽，然后正常培养。本发明风兰的组织培养快速繁殖方法，解决了风兰的繁殖系数低、增殖速度慢的问题，建立了风兰的高效再生体系，该方法不受地区、季节、气候限制，可实现优质种苗的工厂化规模化生产。

主权项

1.一种风兰的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，选取风兰的叶片作为组培用的外植体；对叶片进行诱导培养形成类原球茎；类原球茎通过循环发生和重复发生进行有效增殖，并逐渐分化形成不定芽；不定芽和类原球茎生根培养形成不定根后进行驯化移栽，然后正常培养；具体包括以下步骤：步骤1，外植体的选择及处理选取风兰的叶片为起始材料，消毒后作为组培用的外植体；步骤2，类原球茎的诱导将经过消毒的外植体接种于类原球茎诱导培养基MS+TDZ5.0mg/L上进行培养，叶片基部逐渐形成胚性愈伤组织，胚性愈伤组织逐渐形成类原球茎；步骤3，类原球茎的增殖将步骤2形成的类原球茎转接到类原球茎增殖培养基MS+6‑BA2.0mg/L上进行培养，类原球茎通过重复发生和循环发生实现有效增殖，并逐渐形成不定芽；步骤4，生根成苗及驯化移栽将诱导出的不定芽和类原球茎转接到生根培养基MS+IBA1.0mg/L上进行培养，20～30天后，长出多条肉质不定根，生根成苗成为新的植株，炼苗、缓苗后正常培养；其中，类原球茎诱导培养、类原球茎增殖培养及生根培养的培养条件均为：培养温度25℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为40～60μmol·m‑2·s‑1；其中，类原球茎诱导培养、类原球茎增殖培养及生根培养，所用的基本培养基均为MS培养基，蔗糖用量为20～40g/L，凝固剂为琼脂粉、用量为6～7g/L，活性炭2g/L，椰子汁添加量为10％，培养基pH为5.8。