[发明专利]外源油菜素内酯处理缓解玉米幼苗镉逆境胁迫伤害的方法

摘要

一种外源油菜素内酯处理缓解玉米幼苗镉逆境胁迫伤害的方法，主要包括：种子处理后种植；选取长势良好且长势一致的玉米幼苗120株进行镉胁迫试验；设系列Cd²⁺胁迫浓度梯度，进行Hoagland营养液处理玉米幼苗，培养10d后根据幼苗相对生长速率，筛选出最佳Cd²⁺胁迫浓度；油菜素内酯对Cd²⁺毒害缓解效应试验设置6个处理溶液，向种植了玉米幼苗浇灌相应的6个处理溶液；处理7d后将玉米幼苗进行各项指标的测定；最后进行结果分析与最适EBR浓度筛选。外源油菜素内酯可有效地促进重金属镉胁迫下玉米幼苗的生长，增加玉米幼苗生物量的积累，提高重金属镉胁迫下玉米叶片中的抗氧化酶活性，降低其体内活性氧含量，减少胁迫下电解质外渗，从而减轻重金属镉胁迫对植株的伤害。

主权项

一种外源油菜素内酯处理缓解玉米幼苗镉逆境胁迫伤害的方法，包括如下步骤：（1）、材料准备：准备玉米种子；配置不同浓度的24‑表油菜素内酯水溶液和硝酸镉溶液；（2）、种子处理：选取色泽正常、籽粒饱满、整齐一致的玉米种子，用0.5% 的次氯酸钠消毒10 min，蒸馏水冲洗3～5次，用滤纸吸干附着水，得玉米消毒种子；（3）、试材培育：将玉米消毒种子播种到垫有两层滤纸的的发芽盒中，每发芽盒50粒，发芽盒长×宽×高为13 cm×19 cm×12 cm；置于25℃培养箱中发芽；玉米出苗后，选取生长一致的三叶一心期的幼苗转移到直径8 cm×高为25 cm、内装蛭石的塑料花盆中，每盆植苗8株，于人工气候室内常规培养，每2d用1/5 浓度的Hoaglands 营养液浇灌，待第4片叶长出后，选取长势良好且长势一致的玉米幼苗120株进行镉胁迫试验；（4）、试验处理：4.1设系列Cd²⁺胁迫浓度梯度，进行Hoagland营养液处理玉米幼苗，培养10d后根据幼苗相对生长速率，筛选出最佳Cd²⁺胁迫浓度；本发明采取0 mg•L^‑1 Cd²⁺、25 mg•L^‑1 Cd²⁺、50 mg•L^‑1 Cd²⁺、100 mg•L^‑1 Cd²⁺、150 mg•L^‑1 Cd²⁺与200mg•L^‑1 Cd²⁺ 六个Cd²⁺胁迫浓度；4.2根据步骤4.1的试验结果，选取100mg•L^‑1 Cd²⁺作为胁迫条件，油菜素内酯溶液的浓度设定为五个浓度：0、0.004%、0.008%、0.012%与0.016%；油菜素内酯对Cd²⁺毒害缓解效应试验设置6个处理溶液：a.CK对照，Hoagland溶液；b.含100 mg•L^‑1 Cd²⁺的Hoagland溶液；c.含100 mg•L^‑1 Cd²⁺和0.004%油菜素内酯的Hoagland溶液；d.含100 mg•L^‑1 Cd²⁺和0.008%的油菜素内酯Hoagland溶液；e.含100 mg•L^‑1 Cd²⁺和0.012%的油菜素内酯Hoagland溶液；f.含100 mg•L^‑1 Cd²⁺和0.016%的油菜素内酯Hoagland溶液；将步骤（3）所得玉米幼苗每盆5株，每个处理溶液4盆，隔日向种植了玉米幼苗的塑料花盆里浇灌相应的6个处理溶液，浇灌至花盆底部略有处理液渗出；处理7d后将玉米幼苗进入步骤（5）；（5）、各项指标的测定：将步骤（4）所得玉米幼苗用去离子水冲洗干净，测量株高、根长与植株鲜重后，置于烘箱中105℃杀青30min，再置于80℃烘箱中烘干至恒重，测量植株干重；取玉米幼苗第二片功能叶进行叶片相对电导率、MDA含量 、POD、SOD、CAT活性、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、脯氨酸含量与叶绿素含量的测定；（6）、结果分析与最适EBR 浓度筛选：对步骤（5）测得的镉胁迫处理幼苗的每个样品中的各项数据，采用Microsoft Excel 2003 软件进行数据处理，所有试验数据统计分析SPSS16.0 进行处理，试验结果用平均值±标准偏差(SD) 表示，采用Duncan’s 新复极差法进行多重比较，对各处理进行显著性差异分析；根据测定的玉米幼苗生长的相关指标筛选最佳EBR浓度，并分析EBR对玉米幼苗的影响。