[发明专利]一种高活性粉状毕赤酵母菌粉及其制备方法

摘要

本发明涉及一种高活性粉状毕赤酵母菌粉及其制备方法，该制备方法包括活化培养、一级种子培养、制备高密度液体发酵培养基、发酵培养、补料与添加辅料等步骤。该制备方法可显著提高单位产量30％左右，降低单位成本20％左右，大大提高了设备利用率；复合保护剂和载体赋予了菌体本身最佳保护，从而可以获得高活性粉状毕赤酵母菌粉；本发明与传统离心喷雾干燥生产工艺相比，采用冷风干燥技术干燥温度较低，更好地保留了生物活性，克服了传统工艺低活菌、高投入的缺点，具有广阔的市场前景。

主权项

一种粉状毕赤酵母高活性菌粉的制备方法，其特征在于该制备方法的步骤如下：A、活化培养用无菌吸管吸取0.3～0.5mL麦芽汁液体培养基，滴入装有冻干的粉状毕赤酵母ACCC20136的安瓿内，轻轻振荡，使其溶解呈悬浮状，吸取全部菌悬液，放于1L麦芽汁培养基中，在温度26～30℃下活化培养2～3d；所述的麦芽汁液体培养基制备方法如下：在按照大麦芽与水的重量比1:3～5，把水加到大麦芽中，搅拌混合均匀，然后放于保温箱中在温度55～60℃下进行糖化3.5～4.5h，过滤，得到的糖化麦芽汁在压力0.5～0.7kg/cm2下灭菌38～42min，接着用水将灭菌的糖化麦芽汁稀释至糖度为12波美度，得到所述的麦芽汁液体培养基；按照以YPD培养基重量计3～5％接种量，将活化培养的粉状毕赤酵母ACCC20136接种于YPD培养基斜面上，在温度26～30℃下斜面培养2～3d；B、一级种子培养使用接种环挑取一环斜面培养的粉状毕赤酵母ACCC20136，接种于50～80mL YPD液体培养基中，在温度28～32℃与转速200～250rad/min条件下振荡培养，直到培养液OD600nm达到12.0～15.0时得到一级种子液；C、制备高密度液体发酵培养基将1～3重量份葡萄糖、0.5～1.5重量份蛋白胨、0.1～0.5重量份磷酸二氢钾、0.01～0.05重量份硫酸镁、0.03～0.06重量份硫酸亚铁、0.03～0.06重量份硫酸锰与补充至1000重量份蒸馏水混合均匀，然后在压力0.11～0.15MPa与温度121℃～125℃的条件下灭菌18～22min，接着使用浓度为以体积计22～28％的氨水将其pH值调节至5.0～6.0，得到一种高密度液体发酵培养基；D、发酵培养按照以液体发酵培养基重量计6～10％的接种量，将步骤B得到的种子液接种于在步骤C得到的高密度液体发酵培养基中，在培养温度28～32℃、初始pH 5.5、压力0.03～0.06MPa、转速200～350rad/min与通气比1：1～2.5的条件下进行发酵培养；与此同时，通过通气比、压力与转速调整，将整个发酵过程中溶解氧DO控制在≧20％，通过滴加浓度为以体积计22～28％的氨水将在整个发酵过程中发酵培养液的pH值控制在5.5～6.5；E、补料在整个发酵培养过程中，在通气量、压力与转速不变时，如果溶解氧DO在1min内升高30％以上时，需要按照发酵培养基体积计18～22％的添加量，往发酵培养液中添加由35～45重量份葡萄糖与5～15重量份硫酸镁组成的补料培养基；F、添加辅料在发酵培养结束前0.5～1h，按照发酵培养基体积计1～3％的添加量添加甘露醇保护剂与2～6％的添加量添加吐温80，充分混匀；接着在离心转速2000～4000rpm的条件下离心浓缩2～4倍；再按照发酵培养基体积计20～30％的添加量添加米糠载体、20～30％的添加量添加加益粉载体，充分混匀，接着输送至冷风干燥机中进行冷风干燥，得到粉状毕赤酵母高活性菌粉。