[发明专利]一种麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法

摘要

本发明公开了一种麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法，属于林木快繁领域。该方法包括外植体的选择、愈伤组织的诱导培养和增殖培养、胚状体的诱导和萌发、生根、壮苗、炼苗和移栽入土。本发明提供的诱导培养基、增殖培养基、诱导生芽的培养基和生根培养基，使得麻竹分化效率高、增殖系数高、生根率高，植物生长需求时间短，栽培后适应性强，苗木健壮挺拔，长势良好，整齐一致，大大缩短了苗木培养过程，节约了大量成本。本发明建立了由麻竹的营养组织为起始的愈伤诱导体系，并成功获得再生植株，为麻竹苗的快繁提供了一种技术手段，为将来的麻竹转基因体系建立提供平台。

主权项

1.一种麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：（1）外植体的选择：取多年生的麻竹幼嫩枝条为外植体，经流水冲洗2‑3小时，70wt%的乙醇表面消毒45秒，无菌水冲洗3‑5次，后用0.1wt%的升汞震荡消毒，消毒的时间为8分钟，无菌水冲洗5‑10次；后用无菌纸吸干表面水分，作为外植体备用；（2）愈伤组织的诱导培养和增殖培养：将步骤（1）得到的无菌外植体切成0.5‑1 cm的小段，放在愈伤组织的诱导培养基上，黑暗条件下培养30‑40天后愈伤组织开始形成；诱导出的愈伤组织呈现多种状态，分离淡黄色且致密的胚性愈伤组织，接种到增殖培养基上，在黑暗状态下进行培养，每两周更换一次培养基，增殖培养时间为3‑4周；（3）胚状体的诱导和萌发：分拣步骤（2）增殖良好的愈伤组织接种到诱导生芽的培养基上，光照条件下培养30‑50天，胚状体逐渐诱导生芽；诱导生芽的培养条件是：光照16 h，光照强度2000 lux；（4）生根：将步骤（3）中诱导出的丛生芽从愈伤组织中分离，每3‑5株为一个单位放置入生根培养基中；（5）壮苗、炼苗和移栽入土：步骤（4）中生根培养基中的组培苗在生根的同时进行芽的增殖，在组培苗生根3‑4根后放入自来水中呈半开瓶状态炼苗2‑3天，后将植株从培养基中取出，洗净培养基后，再放置1天；移栽入土后，温室培养1‑2周，温室培养条件为：光照16 h，强度2000 lux，温度21‑26℃；随后进行遮荫散光培养，每天喷水，湿度保持在40wt%‑60wt%；步骤（2）所述的愈伤组织的诱导培养基：MS+BAP 0.3 mg/L+2, 4‑D 4 mg/L+IBA 0.2 mg/L+ 2‑（N‑吗啉代）乙磺酸0.5 g/L+蔗糖 50 mg/L+琼脂粉8 g/L，pH为5.0；步骤（2）所述的增殖培养基：MS+蔗糖50 mg/L+PVP 0.5g/L+2,4‑D 4 mg/L+琼脂粉8 g/L，pH为5.8；步骤（3）所述的诱导生芽的培养基：NB培养基+蔗糖 30 g/L+ 6‑BA 3 mg/L+1.5 mg/L KT+NAA 0.1 mg/L＋250 mg/L PVP+琼脂粉8 g/L，pH为5.8；步骤（4）中所述的生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L+琼脂粉8g/L，pH为6.0。