[发明专利]脂肪间充质干细胞诱导成肝脏样细胞的方法

摘要

本发明涉及脂肪间充质干细胞诱导成肝脏样细胞的方法，采用含多种细胞因子(HGF、FGF4、OSM、EGF、bFGF、aFGF)和生长因子(Dex、Vc、Vpp、ITS)的诱导体系，将脂肪干细胞进行诱导，短期内获得了大量有肝脏功能的肝脏样细胞。采用本发明的诱导培养基诱导后的脂肪干细胞，形态为多角形，并表达ALB、AFP、CK18、CK19和CYP1A1等肝脏样细胞标志物。相比其它诱导体系，此诱导体系缩短了诱导时间，提高了成肝脏样细胞诱导率。由于脂肪干细胞获取容易，体外可大量增殖，又可被诱导成肝脏样细胞，因此是细胞移植和生物人工肝的理想种子细胞。

主权项

脂肪间充质干细胞诱导成肝脏样细胞的方法，其特征是包括以下步骤：(1)脂肪间充质干细胞的原代培养与传代；将脂肪间充质干细胞原代接种培养，待接种后细胞密度达90％以上，则传代；(2)细胞培养；进行传代后接种，并恒温培养；培养基为a‑MEM+10～20v/v％FBS或DMEM+10～20v/v％FBS；(3)成肝脏样细胞诱导培养；细胞贴壁后，将培养基更换为成肝诱导培养基，每隔3～4天换一次成肝诱导培养基；所述成肝诱导培养基为含有20‑50ng/mL FGF4、50‑150ng/mL HGF、20‑40ng/mL OSM、20‑50ng/mL aFGF、1‑20μmol/L Dex、50‑200μmol/L VPP、1‑10mmol/L Vc和1X胰岛素转铁蛋白硒的基础培养基；所述基础培养基为含5～10v/v％FBS的DMEM培养基；(4)成肝脏样细胞诱导；成肝脏样细胞诱导培养7～15天，即诱导成肝脏样细胞。