[发明专利]一种邻苯二甲酸二甲酯降解微生物的分离筛选方法

摘要

一种邻苯二甲酸二甲酯降解微生物的分离筛选方法，取垃圾场附近的土壤5g，加入250mL的无机盐培养基，再加入DMP溶液10mL，驯化10天；制作DMP‑MSM固体平板培养基；涂布菌液；制作DMP‑MSM液体培养基，观察固体平板培养基表面，对于已经生长的菌落进行选择性挑菌，即随机选择20个或更多数量的不同平板生长的单菌落，用接种针将这些菌落挑出，转接入DMP‑MSM液体培养基中，每个单菌落接种一瓶液体培养基，在恒温摇床培养箱中避光、30℃、100r/min培养48h；对20个或更多数量的已培养48h的培养基，进行显微镜观察，对于长出大量微生物的液体培养基重复进行固体—液体混合连续培养，直到显微观察的微生物形态一致，或经分子生物学方法鉴定确定为纯菌种。

主权项

一种邻苯二甲酸二甲酯降解微生物的分离筛选方法，其特征在于，步骤一、取垃圾场附近的土壤5g，加入250mL的无机盐培养基，再加入DMP溶液10mL，驯化10天；步骤二、制作DMP‑MSM固体平板培养基：取无机盐培养基，加入2％的琼脂粉，高温蒸汽灭菌后，倒平板，待冷却凝固后，在每个平板培养基表面加入10mL的DMP溶液，避光室温浸泡24h，然后将固体培养基表面未吸收的剩余DMP溶液用移液枪回收；步骤三、涂布菌液：取驯化好的土壤悬液100uL，均匀涂布在步骤二制作的DMP‑MSM固体平板培养基表面，不倒置，在培养箱中避光、30℃条件下培养48h；步骤四、制作DMP‑MSM液体培养基：取已灭菌的无机盐培养基10mL，加入100uLDMP溶液，再加入5μL吐温‑80，使DMP溶液均匀的分散在无机盐培养基中；步骤五、观察已培养48h的固体平板培养基表面，对于已经生长的菌落进行选择性挑菌，即随机选择20个或更多数量的不同平板生长的单菌落，用接种针将这些菌落挑出，转接入步骤四制作的DMP‑MSM液体培养基中，每个单菌落接种一瓶液体培养基，在恒温摇床培养箱中避光、30℃、100r/min条件下培养48h；步骤六、对步骤五的20个或更多数量的已培养48h的培养基，进行显微镜观察，对于长出大量微生物的液体培养基进行后续的菌种分离纯化；步骤七、微生物的分离纯化：将步骤六中长出大量微生物的液体培养基取出100uL，按照步骤三中的方法，涂布到步骤二中的DMP‑MSM固体培养基表面；重复步骤三至步骤六的实验步骤进行固体——液体连续混合培养，直到显微观察的微生物形态一致，或经分子生物学方法鉴定确定为纯菌种。