[发明专利]一种反胶束分离纯化大豆凝集素的方法

摘要

本发明提供了一种反胶束分离纯化大豆凝集素的方法，包括大豆凝集素水提液制备、反胶束溶液配制、前萃取过程和反萃取过程步骤。本发明所提供的大豆凝集素分离纯化方法所需时间短，对设备要求低，实施成本小、操作快速简便，易于连续化生产和工业化放大，分离纯化和浓缩可同时完成，大豆凝集素纯度达到85%以上，收率达到85%以上，提取过程中采用结构修饰过的松树皮提取物作表面活性剂，能有效保护大豆凝集素，使其不易失活，且纯度高，后续仅需一步简单的离子交换色谱法或层析法即可获得高纯品。

主权项

一种反胶束分离纯化大豆凝集素的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：（1）大豆凝集素水提液制备：将豆类磨成粉，过40～100目筛，溶于蒸馏水中，10～60℃下超声辅助浸提5～60min，浸提后经8000～15000rpm、4℃离心10～20min，取上清液即为大豆凝集素水提液，所述蒸馏水与大豆粉的体积比为5～50：1；（2）反胶束溶液配制：将表面活性剂和助溶剂甘油加入到有机溶剂中，搅拌至表面活性剂完全溶解，再加入水，使体系W_o值=15～35，表面活性剂浓度为200～300mM，静置所得透明溶液即为反胶束溶液，所述助溶剂的添加量为反胶束溶液总量的0～10% ，所述W_o表示反胶束溶液中水与表面活性剂的摩尔浓度比值，W_o≈[H₂O] / [表面活性剂]；（3）前萃取过程：调节步骤（1）所得大豆凝集素水提液pH值为4.0～6.0，离子强度为20～200mM，将其与反胶束溶液按照体积比为1:1～50 的比例混合5～40min 后，1500～5000rpm离心分层，取上层有机相；（4）反萃取过程：将步骤（3）所得上层有机相与丙酮、蒸馏水混合5～40min后，1500～5000rpm离心分层，取下层水相，经冷冻干燥，得到分离纯化后的大豆凝集素，所述步骤（3）所得上层有机相与丙酮、蒸馏水的体积比为1：1～5：1～5。