[发明专利]一种鳞翅目幼虫基因组DNA的提取方法

摘要

本发明提供了一种提取鳞翅目幼虫基因组DNA的有效方法，鳞翅目幼虫细胞内含有大量的蛋白质，这是影响DNA纯度的主要原因，本发明以鳞翅目幼虫斜纹夜蛾为例，利用1％CTAB提取液以及饱和苯酚、氯仿、异戊醇混合液去除组织蛋白，其去除组织蛋白效果相对于单纯用氯仿、异戊醇混合液去除组织蛋白的效果要好很多，因为在低温条件下饱和苯酚与组织蛋白的结合使其变性的能力远高于氯仿/异戊醇；为了确保DNA的完整性和活性在操作过程中要求十分谨慎(摇晃样品时不能太剧烈)，以及异丙醇高效沉淀DNA，最终较彻底去除杂质，得到高纯度的基因组DNA。

主权项

一种鳞翅目幼虫基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤①：将鳞翅目幼虫放入无菌研钵中，然后添加液氮将鳞翅目幼虫研成粉末；步骤②：将所述步骤①中的粉末转移到无菌离心管中，并倒入提取液，混匀，之后加入β‑巯基乙醇，60～70℃水浴30～45分钟，混匀，得到混合液Ⅰ；步骤③：给所述步骤②中混合液Ⅰ加入饱和苯酚、氯仿、异戊醇混合液，震荡摇匀，静置，离心后取上清液到一支新的离心管中，然后加入核糖核酸酶，使浓度达50ug/ml,然后30～40℃水浴20～40分钟，得到混合液Ⅱ；步骤④：将所述步骤③中混合液Ⅱ离心后取上清液到新的离心管内，加入饱和苯酚、氯仿、异戊醇混合液，混匀，再次离心后取上清液至新的离心管，加入预冷异丙醇，混匀，离心后弃上清液，得到混合液Ⅲ；步骤⑤：将所述步骤④中的混合液Ⅲ洗涤脱盐，离心后弃上清液，得到鳞翅目幼虫基因组DNA，最后加无菌水溶解，保存。